| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-29页 |
| ·菌寄生研究现状与进展 | 第15-17页 |
| ·寄生真菌与寄生菌初始相互识别 | 第15-16页 |
| ·寄生性真菌与寄生菌识别信号的传导途径 | 第16页 |
| ·寄生性真菌与寄生菌互作产生的水解酶类研究 | 第16-17页 |
| ·疏水蛋白的研究进展 | 第17-23页 |
| ·疏水蛋白的理化性质和一级结构研究 | 第17-18页 |
| ·疏水蛋白对病原真菌致病性及与其寄主互作的研究 | 第18-19页 |
| ·疏水蛋白其他功能的研究 | 第19-20页 |
| ·疏水蛋白的自我组装及原子力显微镜的观察研究 | 第20页 |
| ·疏水蛋白空间结构的研究 | 第20-21页 |
| ·疏水蛋白的应用研究 | 第21-22页 |
| ·轮枝镰孢疏水蛋白的研究现状 | 第22-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第23-24页 |
| ·组氨酸标签（His-Tag）的镍柱亲和层析 | 第24页 |
| ·真菌基因转化及基因敲除的研究 | 第24-26页 |
| ·丝状真菌的转化方法 | 第24页 |
| ·真菌基因敲除的研究 | 第24-26页 |
| ·轮枝镰孢的转化方法研究 | 第26页 |
| ·植物防御反应基因的相关研究 | 第26-27页 |
| ·选题的目的意义、研究内容和技术路线 | 第27-29页 |
| ·选题的目的意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-52页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·供试菌株 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂以及酶 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·溶液配制 | 第30-32页 |
| ·实验方法 | 第32-52页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 基因克隆表达与功能分析 | 第32-39页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 基因的克隆 | 第32-35页 |
| ·轮枝镰孢总 RNA 的提取及检测 | 第32-33页 |
| ·测定 RNA 的浓度和纯度及 1℅的琼脂糖电泳检测 | 第33页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 基因 cDNA 全长克隆 | 第34页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第34页 |
| ·回收产物与克隆载体连接 | 第34-35页 |
| ·构建好的克隆载体转化大肠杆菌（E.coli）感受态细胞 | 第35页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 三种基因基因序列测定 | 第35页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 三种基因序列生物信息学分析 | 第35页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4 和 FvHYD5 基因成熟肽序列的限制性酶切位点分析 | 第35页 |
| ·三种疏水蛋白基因和融合蛋白基因引物设计 | 第35-39页 |
| ·三种疏水蛋白基因的表达引物设计 | 第35-38页 |
| ·四种基因阳性质粒的提取 | 第38页 |
| ·四种阳性克隆质粒 DNA 的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 以及 FvHYD3 和纤维素酶基因 egl 融合基因序列测定 | 第39页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 以及融合基因在毕赤酵母中的表达 | 第39-45页 |
| ·四种基因的毕赤酵母表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第39-40页 |
| ·线性化重组质粒 DNA 的纯化 | 第40页 |
| ·线性化重组质粒转化酵母 | 第40-41页 |
| ·酵母 GS115 感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·线性化重组表达载体质粒电击转化酵母 GS115 感受态细胞 | 第41页 |
| ·酵母转化子甲醇利用表型的平板筛选 | 第41页 |
| ·酵母转化子的 PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·外源基因多拷贝整合转化子筛选 | 第42-43页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 以及融合基因的表达与产物纯化 | 第43页 |
| ·五种疏水蛋白基因表达产物及融合基因表达产物的纯化 | 第43-44页 |
| ·粗蛋白液的样品预处理 | 第43页 |
| ·五种疏水蛋白的 Ni-NTA 亲和层析纯化和融合基因产物的 DEAE 亲和层析 | 第43-44页 |
| ·表达产物纯化后蛋白制品 SDS-PAGE 分析 | 第44页 |
| ·五种疏水蛋白的 Western-blot 分析 | 第44-45页 |
| ·五种疏水蛋白的糖染色 | 第45页 |
| ·五种疏水蛋白及融合基因表达产物的性质研究 | 第45-47页 |
| ·五种疏水蛋白凝血性质的验证 | 第45-46页 |
| ·疏水蛋白对真菌孢子的凝集性实验 | 第46页 |
| ·疏水蛋白糖抑制实验 | 第46页 |
| ·金属离子对疏水蛋白活性的影响 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白的性质研究 | 第47页 |
| ·表达融合蛋白基因的酵母菌体的研究 | 第47页 |
| ·表达融合蛋白的吸附性的研究 | 第47页 |
| ·轮枝镰孢的疏水蛋白的基因敲除 | 第47-49页 |
| ·轮枝镰孢原生质体的制备及转化 | 第47-48页 |
| ·轮枝镰孢转化子的 PCR 检测 | 第48-49页 |
| ·轮枝镰孢转化子总 DNA 的提取（CATB 法） | 第48页 |
| ·轮枝镰孢转化子的 PCR 检测 | 第48-49页 |
| ·枝镰孢菌 FvHYD5 基因的缺失突变体 | 第49页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin3、Hydrophobin4、Hydrophobin5 对玉米叶片的影响 | 第49-51页 |
| ·三种疏水蛋白对于玉米叶片防卫酶基因表达情况的研究 | 第49-50页 |
| ·三种疏水蛋白对于玉米叶片防卫酶酶活性的影响 | 第50-51页 |
| ·丙氨酸解氨酶（PAL）活性测定 | 第50页 |
| ·过氧化氢酶（POD）活性测定 | 第50-51页 |
| ·过氧化氢酶同工酶谱的测定 | 第51页 |
| ·Ⅱ型疏水蛋白 Hydrophobin4 对于玉米髓部组织的防卫酶酶活性的研究 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-108页 |
| ·轮枝镰孢总 RNA 的提取（Trizol 法） | 第52-87页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 目的基因的分离 | 第52-53页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因核苷酸序列及氨基酸序列分析 | 第53-66页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 基因核苷酸及氨基酸序列分析 | 第53-55页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD4 基因的核苷酸及氨基酸序列分析 | 第55-57页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD5 基因的核苷酸及氨基酸序列分析 | 第57-59页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因成熟肽基因序列的分离 | 第59-66页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 成熟肽基因的氨基酸序列分析 | 第59-62页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因及纤维素酶基因 eg1 基因成熟肽序列的限制性酶切位点分析结果 | 第62-64页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因和融合基因的编码序列的分离 | 第64-66页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因和融合基因 FvHYD3-eg1 在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第66-70页 |
| ·四种基因的酵母表达载体的构建 | 第66-68页 |
| ·四种基因酵母表达载体的构建示意图 | 第68-70页 |
| ·四种表达载体质粒转化酵母感受态细胞及酵母转化子的筛选 | 第70-76页 |
| ·四种基因酵母转化子的甲醇利用表型的筛选 | 第70-72页 |
| ·四种基因酵母转化子的 PCR 鉴定 | 第72-75页 |
| ·轮枝镰孢 FvHYD3 、FvHYD4、FvHYD5 基因和融合基因 FvHYD3-eg1 酵母多拷贝转化子的筛选 | 第75-76页 |
| ·四种基因诱导表达产物的纯化 | 第76-80页 |
| ·五种疏水蛋白纯化产物的 Western-blot 验证 | 第80-81页 |
| ·五种疏水蛋白的糖基化分析及糖染色 | 第81-87页 |
| ·五种疏水蛋白及融合基因表达产物的功能研究 | 第87-96页 |
| ·五种疏水蛋白凝集素活性的研究 | 第87-95页 |
| ·疏水蛋白凝血性质的验证 | 第87-89页 |
| ·疏水蛋白孢子凝集性的验证 | 第89-94页 |
| ·疏水蛋白对轮枝镰孢孢子的凝集 | 第89-90页 |
| ·疏水蛋白对九州镰孢菌孢子的凝集 | 第90-91页 |
| ·疏水蛋白对纤细齿梗孢孢子的凝集性 | 第91-94页 |
| ·糖溶液对疏水蛋白凝集活性的影响 | 第94页 |
| ·不同金属离子对疏水蛋白的影响 | 第94-95页 |
| ·疏水蛋白基因 FvHYD3 和纤维素酶基因 eg1 的融合蛋白的性质研究 | 第95-96页 |
| ·表达融合蛋白的酵母菌体的研究 | 第95页 |
| ·融合蛋白纯化产物的研究 | 第95-96页 |
| ·轮枝镰孢疏水蛋白基因敲除突变体的获取 | 第96-99页 |
| ·轮枝镰孢的各种突变体 | 第96-97页 |
| ·轮枝镰孢疏水蛋白基因 FvHYD5 基因缺失突变体的验证 | 第97-98页 |
| ·轮枝镰孢疏水蛋白基因 FvHYD5 基因缺失突变体 | 第98-99页 |
| ·疏水蛋白对玉米组织的影响 | 第99-108页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin3、Hydrophobin4、Hydrophobin5 接种玉米叶片后的发病情况 | 第99-100页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin3、Hydrophobin4、Hydrophobin5 接种玉米叶片后防卫反应基因的表达情况 | 第100-101页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin3、Hydrophobin4、Hydrophobin5 接种玉米叶片后 PAL 酶和POD 酶活性的变化情况 | 第101-103页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin3、Hydrophobin4、Hydrophobin5 接种玉米叶片后 POD 同工酶变化情况 | 第103-105页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin4 接种玉米髓部组织后 POD、PAL 酶活性的变化 | 第105-106页 |
| ·疏水蛋白 Hydrophobin4 接种玉米髓部组织后 POD 同工酶酶谱变化情况 | 第106-108页 |
| 4 讨论 | 第108-111页 |
| ·疏水蛋白分子量的研究 | 第108页 |
| ·疏水蛋白凝集活性的研究 | 第108-109页 |
| ·融合基因表达产物的研究 | 第109-110页 |
| ·疏水蛋白突变体的研究 | 第110页 |
| ·疏水蛋白对于玉米防御反应的影响 | 第110-111页 |
| 5 结论与建议 | 第111-112页 |
| ·结论 | 第111页 |
| ·建议 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第123页 |
