| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 1 前言 | 第17-38页 |
| ·VLCPUFAs 的研究进展 | 第17-31页 |
| ·VLCPUFAs 的命名及分类 | 第18-19页 |
| ·VLCPUFAs 的生物学功能 | 第19-21页 |
| ·VLCPUFAs 对人体健康的作用 | 第19页 |
| ·VLCPUFAs 其它生物学功能 | 第19-21页 |
| ·VLCPUFAs 的生物合成途径 | 第21-22页 |
| ·VLCPUFAs 合成相关基因 | 第22-24页 |
| ·脂肪酸链延长酶基因 | 第23页 |
| ·脂肪酸去饱和酶基因 | 第23-24页 |
| ·VLCPUFAs 的来源及存在的问题 | 第24-25页 |
| ·VLCPUFAs 在转基因植物中的异源合成 | 第25-31页 |
| ·VLCPUFAs 合成途径的优化 | 第31-37页 |
| ·基因优化 | 第31-34页 |
| ·密码子优化基因表达研究进展 | 第31-33页 |
| ·基因优化方法 | 第33-34页 |
| ·启动子 | 第34-37页 |
| ·高等植物启动子研究进展 | 第34-36页 |
| ·种子特异性启动子的应用 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-53页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第38页 |
| ·马铃薯致病疫霉及生长条件 | 第38页 |
| ·酿酒酵母 YPH500 及生长条件 | 第38页 |
| ·强壮前沟藻及生长条件 | 第38页 |
| ·菌株及质粒 | 第38页 |
| ·酶及生化试剂 | 第38-39页 |
| ·本论文所用引物 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-53页 |
| ·基因组 DNA 提取（SDS 法） | 第40-41页 |
| ·总 RNA 的提取（试剂盒） | 第41-42页 |
| ·RNA 甲醛变性胶电泳检测 | 第42-43页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成（一般扩增或 3′RACE） | 第43页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成（SMART 5′RACE） | 第43-44页 |
| ·PCR 扩增 | 第44页 |
| ·连接反应 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第45页 |
| ·质粒 DNA 提取（试剂盒） | 第45-46页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第46页 |
| ·去磷酸化反应 | 第46-47页 |
| ·DNA 片段回收（试剂盒） | 第47页 |
| ·表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第48页 |
| ·酵母菌落 PCR | 第48页 |
| ·酿酒酵母的诱导表达及菌体收集 | 第48-49页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第49-50页 |
| ·根癌农杆菌冻融法感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第50-51页 |
| ·种子处理 | 第50页 |
| ·从培养皿中移栽拟南芥 | 第50页 |
| ·拟南芥转化 | 第50-51页 |
| ·转基因拟南芥分析 | 第51页 |
| ·农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第51-52页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第52页 |
| ·脂肪酸的提取及分析 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-83页 |
| ·EPA 合成途径关键酶基因的克隆及其在高等植物中的功能鉴定 | 第53-71页 |
| ·球等鞭金藻 Δ5 去饱和酶基因 IgD5 在拟南芥中的功能鉴定 | 第53-58页 |
| ·球等鞭金藻脂肪酸成分分析 | 第53-54页 |
| ·IgD5 的克隆与系统进化分析 | 第54页 |
| ·植物表达载体 pCambia1300-IgD5 的构建 | 第54-55页 |
| ·IgD5 的转化及转基因植株的筛选与鉴定 | 第55-56页 |
| ·转基因拟南芥叶片脂肪酸成分分析 | 第56-57页 |
| ·IgD5 与其他 Δ5 去饱和酶的活性比较 | 第57-58页 |
| ·马铃薯致病疫霉 EPA 合成途径在烟草中的重组鉴定 | 第58-67页 |
| ·马铃薯致病疫霉的脂肪酸成分分析 | 第58-59页 |
| ·马铃薯致病疫霉 EPA 合成途径中关键酶基因的克隆 | 第59-62页 |
| ·过度载体 pAUX2-PinD6PinE6PinD5 的组装 | 第62-64页 |
| ·植物表达载体 pCambia2300-PinD6PinD5PinE6 的构建 | 第64-65页 |
| ·PinD6、PinD5、PinE6 基因在烟草中的表达检测 | 第65-67页 |
| ·PinΔ5 去饱和酶基因的密码子优化 | 第67-71页 |
| ·PinΔ5 基因在酵母中表达时密码子使用频率分析 | 第67-69页 |
| ·PinD5 去饱和酶基因密码子的优化及酵母转化 | 第69-70页 |
| ·转基因酵母的脂肪酸成分分析 | 第70-71页 |
| ·多基因辅助载体的系列化构建与应用 | 第71-83页 |
| ·多基因系列辅助载体的构建 | 第71-72页 |
| ·多基因系列辅助载体在拟南芥 EPA 异源合成中的应用 | 第72-78页 |
| ·Δ8 合成途径中三个基因的克隆 | 第73-75页 |
| ·三个基因表达盒的串联 | 第75-76页 |
| ·植物表达载体 pCambia2300-E9D8D5 的获得 | 第76-77页 |
| ·转基因拟南芥的检测以及脂肪酸分析 | 第77-78页 |
| ·多基因系列辅助载体在棉花 EPA 异源合成中的应用 | 第78-83页 |
| ·植物表达载体 pCambia2300-4EC 的构建 | 第78-79页 |
| ·多基因载体的转化以及转基因棉花的筛选与鉴定 | 第79-81页 |
| ·转基因棉花叶片脂肪酸检测 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-89页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸合成途径中相关基因的功能鉴定 | 第83-86页 |
| ·多基因辅助载体的系列化构建与应用 | 第86-89页 |
| 5 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第99页 |
