| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1 鱼类的免疫系统 | 第12页 |
| 2 MH CII类基因的研究进展 | 第12-15页 |
| ·国内外有关鱼类MHCⅡ基因克隆的研究进展 | 第13页 |
| ·国内外有关鱼类MHCⅡ类基因在正常及病原感染后器官、组织分布的研究进展 | 第13-14页 |
| ·国内外有关鱼类 MHC基因多态性的研究以及与抗病相关性的研究进展 | 第14-15页 |
| 3．论文的思路和技术路线 | 第15-18页 |
| 第一章 尼罗罗非鱼全长CDNA及基因组序列克隆 | 第18-38页 |
| 1 材料与方法 | 第18-27页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·试验用试剂 | 第18页 |
| ·其他试剂 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-27页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·尼罗罗非鱼总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·尼罗罗非鱼基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·RN A 反转录成 cDNA11 | 第22-23页 |
| ·尼罗罗非鱼 MHCⅡ类基因cDNA及基因组序列的扩增 | 第23-24页 |
| ·P CR 扩增片段的琼脂糖凝胶回收 | 第24-25页 |
| ·P CR 纯化产物的克隆 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| ·阳性菌落检测及测序 | 第26页 |
| ·尼罗罗非鱼MHCⅡ类基因 cDNA多态性分析 | 第26-27页 |
| ·尼罗罗非鱼MHCⅡA 和 MHCⅡB 基因的基因组序列的扩增 | 第27页 |
| ·分析方法 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-36页 |
| ·尼罗罗非鱼鳃组织总 RN A 的提取 | 第27-28页 |
| ·尼罗罗非鱼 MHCⅡ 类基因序列克隆 | 第28-33页 |
| ·MHCⅡ A 与 MHCⅡ B 基因cDNA多态性的分析 | 第33页 |
| ·MHCⅡ 类基因与其他物种该基因的同源性分析及系统进化树构建 | 第33-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第二章 尼罗罗非鱼MHCⅡ类基因组织表达特征 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·实验鱼和菌种 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·实时定量 PC R 实验的质粒构建 | 第38-39页 |
| ·表达量最稳定的内参基因的筛选 | 第39页 |
| ·健康尼罗罗非鱼MHCⅡ类基因的组织表达 | 第39-40页 |
| ·感染链球菌后尼罗罗非鱼MHCⅡ类基因的组织表达变化 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-50页 |
| ·尼罗罗非鱼总 RN A 的提取 | 第40页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第41-42页 |
| ·目的基因和内参基因的溶解曲线 | 第42-43页 |
| ·内参基因筛选 | 第43-47页 |
| ·健康尼罗罗非鱼 MHCⅡ 类基因的组织表达 | 第47-49页 |
| ·感染链球菌后尼罗罗非鱼MHCⅡ类基因的组织表达变化 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 MHCⅡB 基因多态性及其与尼罗罗非鱼链球菌抗性的关系 | 第51-60页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·DNA提取和PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第52页 |
| ·序列多态性分析 | 第52页 |
| ·尼罗罗非鱼 MHC-DAB等位基因命名 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-57页 |
| ·尼罗罗非鱼MHCⅡ B 基因序列测定 | 第52-53页 |
| ·尼罗罗非鱼抗病群体与感病群体 MHCⅡB 基因的多态性 | 第53-56页 |
| ·等位基因的分布 | 第53-54页 |
| ·多态位点变异 | 第54-56页 |
| ·MHC class ⅡB 等位基因与抗病力的关系 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| ·尼罗罗非鱼MHCⅡB基因多态性 | 第57页 |
| ·尼罗罗非鱼MHCⅡB基因多态性与链球菌病抗性的相关性 | 第57-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 1 尼罗罗非鱼MHCⅡ类cDNA及基因组的克隆 | 第60页 |
| 2 尼罗罗非鱼MHCⅡ类cDNA及基因的表达特征 | 第60页 |
| 3 尼罗罗非鱼MHCⅡB 基因多态性及其与尼罗罗非鱼链球菌抗性的关系 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录一 缩略词表 | 第68-69页 |
| 附录二 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
