| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-22页 |
| 缩略语 | 第22-24页 |
| 前言 | 第24-33页 |
| 第一章 Polη缺陷肝细胞株的构建及鉴定 | 第33-62页 |
| ·材料 | 第33-38页 |
| ·细胞株、菌株、包装细胞和质粒载体 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂、试剂盒及耗材 | 第35-36页 |
| ·主要溶液配制 | 第36-38页 |
| ·方法 | 第38-49页 |
| ·用RNA干扰技术建立人L-02肝细胞的Polη缺陷细胞株 | 第38-46页 |
| ·Polη稳定干扰的肝细胞株的鉴定 | 第46-48页 |
| ·正常肝细胞和Polη缺陷肝细胞的细胞生物学特性比较 | 第48-49页 |
| ·实验数据的统计学分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-57页 |
| ·pLKO.1-puro的双酶切产物的鉴定及回收 | 第49页 |
| ·阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·各组重组质粒的测序鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·POLH基因干扰效果的荧光定量PCR鉴定 | 第51-54页 |
| ·POLH蛋白质表达水平的Western blot鉴定 | 第54-55页 |
| ·L-02、L02-POLH-nvc、L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞的生物学特性比较 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-62页 |
| 第二章 Polη缺陷对氢醌作用下肝细胞的生物学特性及DNA损伤的影响 | 第62-82页 |
| ·材料 | 第62-65页 |
| ·细胞及受试物 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·主要试剂、试剂盒及耗材 | 第63-64页 |
| ·主要溶液配制 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-69页 |
| ·细胞培养、分组及处理 | 第65页 |
| ·细胞形态学观察 | 第65页 |
| ·细胞活力检测 | 第65-66页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第66页 |
| ·细胞周期分布检测 | 第66-67页 |
| ·彗星实验检测DNA损伤状况 | 第67-68页 |
| ·细胞免疫荧光法结合激光共聚焦显微术检测γ-H2AX焦点形成状况 | 第68页 |
| ·实验数据的统计学分析 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-79页 |
| ·HQ作用下L-02、L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞形态学比较 | 第69页 |
| ·HQ作用下L-02、L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞的活力比较 | 第69-71页 |
| ·Polη缺陷对HQ所致肝细胞凋亡的影响 | 第71-74页 |
| ·Polη缺陷对HQ作用条件下肝细胞的细胞周期分布特征的影响 | 第74-76页 |
| ·Polη缺陷对HQ所致肝细胞DNA损伤的影响 | 第76-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第三章 Polη缺陷对氢醌作用下肝细胞内DNA损伤检查点蛋白的表达及分布的影响 | 第82-143页 |
| ·材料 | 第83-87页 |
| ·细胞及受试物 | 第83页 |
| ·主要仪器 | 第83-84页 |
| ·主要试剂、试剂盒及耗材 | 第84-85页 |
| ·主要溶液配制 | 第85-87页 |
| ·方法 | 第87-94页 |
| ·细胞培养及处理 | 第87页 |
| ·各目的基因mRNA表达水平的qPCR检测 | 第87-91页 |
| ·各目的蛋白表达水平的Western blot检测 | 第91-94页 |
| ·细胞免疫荧光实验结合激光共聚焦显微术检测目的蛋白的亚细胞定位状况 | 第94页 |
| ·实验数据的统计学分析 | 第94页 |
| ·结果 | 第94-134页 |
| ·RNA纯度和完整性分析 | 第94-95页 |
| ·标准曲线及熔解曲线分析 | 第95-99页 |
| ·各目的基因扩增片段的定性鉴定 | 第99-101页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞ATM表达及分布的影响 | 第101-105页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞ATR表达及分布的影响 | 第105-108页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞Chk1表达、磷酸化及分布的影响 | 第108-113页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞Chk2表达、磷酸化及分布的影响 | 第113-118页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞p53表达、磷酸化及分布的影响 | 第118-123页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞H2AX表达、磷酸化及分布的影响 | 第123-128页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞RPA2表达、磷酸化及分布的影响 | 第128-133页 |
| ·HQ对L02-POLH-nsc和L02-POLH-sh细胞RPA2和γ-H2AX共定位特征影响 | 第133-134页 |
| ·讨论 | 第134-143页 |
| 结语 | 第143-146页 |
| 参考文献 | 第146-160页 |
| 综述 | 第160-178页 |
| 主要参考文献 | 第173-178页 |
| 致谢 | 第178-179页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第179-180页 |
