| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| ·海藻糖研究现状 | 第13-18页 |
| ·海藻糖简介 | 第13页 |
| ·海藻糖的结构与性质 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的生物学特性及作用机理 | 第14-15页 |
| ·海藻糖的制取 | 第15-17页 |
| ·海藻糖的应用 | 第17-18页 |
| ·海藻糖基因工程方面的研究 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第19-23页 |
| ·芽孢杆菌简介 | 第19-20页 |
| ·芽孢杆菌表达系统的特点——相对于大肠杆菌 | 第20页 |
| ·芽孢杆菌表达系统的特殊性 | 第20页 |
| ·芽孢杆菌的缺点 | 第20-21页 |
| ·芽孢杆菌中常运用于基因工程的宿主和载体 | 第21页 |
| ·枯草芽孢杆菌的应用 | 第21-23页 |
| ·枯草芽孢杆菌在食品中的应用 | 第21-22页 |
| ·枯草芽孢杆菌在饲料中的应用 | 第22页 |
| ·枯草芽孢杆菌在医药中的应用 | 第22-23页 |
| ·枯草芽孢杆菌在洗涤品中的应用 | 第23页 |
| ·枯草芽孢杆菌在纺织皮革中的应用 | 第23页 |
| ·本课题的立题背景和研究内容 | 第23-25页 |
| ·立题背景 | 第23页 |
| ·立题意义 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-25页 |
| 技术路线 | 第25-27页 |
| 第2章 海藻糖合酶基因克隆与枯草芽孢杆菌工程菌的构建 | 第27-49页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-32页 |
| ·实验菌株 | 第27页 |
| ·分子试剂 | 第27-28页 |
| ·化学试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·主要培养基 | 第29页 |
| ·试剂的配制方法 | 第29-31页 |
| ·海藻糖检测方法 | 第31-32页 |
| ·酶活定义 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·恶臭假单胞菌 KT2440 基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·引物设计与 PCR 扩增目的基因片段 | 第33页 |
| ·目的片段回收 | 第33-34页 |
| ·目的片段与 pMA5 的酶切与载体连接 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态制备与转化 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态制备与转化 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态制备 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态转化 | 第35页 |
| ·重组子的验证 | 第35-36页 |
| ·枯草芽孢杆菌 WB600 感受态的制备及转化 | 第36-38页 |
| ·枯草芽孢杆菌 WB600 生长曲线测定 | 第36页 |
| ·枯草芽孢杆菌 WB600 感受态的制备 | 第36-38页 |
| ·重组子的菌落 PCR 验证与质粒酶切验证 | 第38页 |
| ·重组菌 WB600( pMA5-tres)的表达 | 第38页 |
| ·阳性枯草芽孢杆菌重组子产海藻糖合酶酶活验证 | 第38-39页 |
| ·阳性枯草芽孢杆菌重组子的活化培养 | 第38页 |
| ·阳性枯草芽孢杆菌重组子的菌体破碎 | 第38-39页 |
| ·酶活验证 | 第39页 |
| ·质粒稳定性 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-48页 |
| ·海藻糖合酶基因克隆与载体构建 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态制备与转化 | 第41页 |
| ·大肠杆菌 DH5α生长曲线的绘制 | 第41页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态制备与转化 | 第41页 |
| ·转化子的验证 | 第41-42页 |
| ·阳性转化子测序验证 | 第42-44页 |
| ·枯草芽孢杆菌 WB600 感受态的制备 | 第44页 |
| ·pMA5-tres 导入枯草芽孢杆菌 WB600 及海藻糖合酶的表达 | 第44-46页 |
| ·枯草芽孢杆菌 P08 海藻糖合酶酶活验证 | 第46-47页 |
| ·质粒稳定性 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌 P08 产海藻糖合酶酶学特性研究 | 第49-57页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49-50页 |
| ·药品 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·蛋白质部分性质预测 | 第50页 |
| ·摇瓶培养 | 第50页 |
| ·菌体破碎 | 第50-51页 |
| ·菌体干重测定 | 第51页 |
| ·最佳底物浓度研究 | 第51页 |
| ·最适反应 pH 研究 | 第51页 |
| ·最佳反应温度研究 | 第51-52页 |
| ·最佳反应时间研究 | 第52页 |
| ·最佳反应转速研究 | 第52页 |
| ·实验结果分析 | 第52-56页 |
| ·蛋白质部分性质预测 | 第52-53页 |
| ·最佳底物浓度研究 | 第53-54页 |
| ·最佳反应 pH 研究 | 第54页 |
| ·最佳反应温度研究 | 第54-55页 |
| ·最佳反应时间研究 | 第55页 |
| ·最佳反应转速研究 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 大肠杆菌 P06 和枯草芽孢杆菌 P08 对比发酵实验 | 第57-61页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第57-58页 |
| ·菌种 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| ·仪器 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·菌种活化 | 第58页 |
| ·大肠杆菌 P06 和枯草芽孢杆菌 P08 的对比发酵实验与酶活测定 | 第58-59页 |
| ·菌体干重的测定 | 第59页 |
| ·酶活的测定 | 第59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-60页 |
| ·大肠杆菌 P06 和枯草芽孢杆菌 P08 的对比发酵实验 | 第59-60页 |
| ·酶活对比实验 | 第60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·主要结论 | 第61-62页 |
| ·课题展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 在学期间主要研究成果 | 第71页 |
