摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略词中英文对照 | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-21页 |
1 Bt抗性简介 | 第13-17页 |
·Bt的发现和研究历史 | 第13-14页 |
·Bt杀虫晶体蛋白分类 | 第14页 |
·Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机理 | 第14-15页 |
·Bt在农业害虫防治中的应用 | 第15页 |
·Bt抗性的产生 | 第15-17页 |
2 荧光实时定量PCR | 第17-18页 |
·荧光实时定量PCR技术原理 | 第17-18页 |
·荧光实时定量PCR技术中内参基因选择重要性 | 第18页 |
3 RNA干扰技术 | 第18-21页 |
·RNAi的发现 | 第18-19页 |
·RNAi的机制 | 第19-20页 |
·RNAi技术的应用 | 第20-21页 |
第二章 二化螟中五个重要持家基因的稳定性分析 | 第21-33页 |
摘要 | 第21页 |
1 材料与方法 | 第21-26页 |
·主要试剂和仪器设备 | 第21-22页 |
·供试昆虫的饲养 | 第22页 |
·候选内参基因的选择以及引物设计 | 第22-23页 |
·总RNA的提取 | 第23-24页 |
·cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
·qRT-PCR | 第25-26页 |
·数据分析 | 第26页 |
2 结果与分析 | 第26-31页 |
·持家基因的确定 | 第26页 |
·持家基因表达量的变化 | 第26-27页 |
·在二化螟不同发育阶段持家基因的稳定性分析 | 第27-28页 |
·在二化螟不同组织中持家基因的稳定性分析 | 第28-29页 |
·在二化螟所有样品中持家基因的稳定性分析 | 第29-31页 |
3 讨论 | 第31-33页 |
第三章 二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因全长克隆及序列分析 | 第33-47页 |
摘要 | 第33页 |
1 材料与方法 | 第33-40页 |
·主要试剂和仪器设备 | 第33-34页 |
·供试昆虫的饲养 | 第34页 |
·二化螟中与Bt相关基因的预测 | 第34页 |
·引物设计 | 第34页 |
·总RNA的提取 | 第34-35页 |
·cDNA的合成 | 第35页 |
·RACE cDNA的合成 | 第35-36页 |
·PCR反应 | 第36-37页 |
·分子克隆 | 第37-40页 |
2 结果与分析 | 第40-44页 |
·基因片段验证分析 | 第40页 |
·受体蛋白基因的RACE扩增分析 | 第40-44页 |
·四类Bt杀虫晶体蛋白受体基因的进化分析 | 第44页 |
3 讨论 | 第44-47页 |
第四章 二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因在不同龄期中肠组织中的表达分析 | 第47-57页 |
摘要 | 第47页 |
1 材料与方法 | 第47-50页 |
·主要试剂和仪器设备 | 第47-48页 |
·供试昆虫的饲养 | 第48页 |
·引物设计 | 第48-49页 |
·总RNA的提取 | 第49页 |
·cDNA第一链的合成 | 第49页 |
·qRT-PCR检测各个基因mRNA水平表达量变化 | 第49-50页 |
2 结果 | 第50-55页 |
·钙粘蛋白在二化螟不同发育阶段中肠组织中表达量分析 | 第50-51页 |
·氨肽酶在二化螟不同发育阶段中肠组织的表达量分析 | 第51-53页 |
·碱性磷酸酶在二化螟不同发育阶段中肠中表达量分析 | 第53页 |
·糖脂转移酶在二化螟不同发育阶段中肠中表达量分析 | 第53-55页 |
3 讨论 | 第55-57页 |
第五章 二化螟钙粘蛋白在不同组织中的表达分析及RNA干扰 | 第57-71页 |
摘要 | 第57页 |
1 材料与方法 | 第57-60页 |
·试虫来源及饲养 | 第57-58页 |
·主要试剂和仪器 | 第58页 |
·二化螟两个钙粘蛋白干扰片段位置 | 第58-59页 |
·二化螟siRNA的喂食 | 第59页 |
·RNA提取及定量PCR分析 | 第59-60页 |
·数据统计 | 第60页 |
2 结果 | 第60-68页 |
·两个钙粘蛋白在不同组织中的表达量分析 | 第60-61页 |
·siRNA的喂食时间确定 | 第61-62页 |
·RNA干扰后的钙粘蛋白基因表达量变化 | 第62-63页 |
·RNAi干扰后二化螟取食转基因水稻的存活率变化 | 第63-68页 |
3 讨论 | 第68-71页 |
全文总结 | 第71-73页 |
附录:利用实时定量PCR评价并验证三种鳞翅目昆虫中候选持家基因的稳定性 | 第73-85页 |
摘要 | 第73页 |
1 材料与方法 | 第73页 |
2 结果与分析 | 第73-83页 |
·持家基因的确定 | 第73-74页 |
·持家基因表达量的变化 | 第74-76页 |
·在不同发育阶段持家基因的稳定性分析 | 第76-77页 |
·在不同组织中持家基因的稳定性分析 | 第77-78页 |
·在所有样品中持家基因的稳定性分析 | 第78-80页 |
·选择不同持家基因对荧光定量PCR数据结果的影响 | 第80-83页 |
3 讨论 | 第83-85页 |
参考文献 | 第85-93页 |
攻读硕士学位期间学术论文的发表情况 | 第93-95页 |
致谢 | 第95页 |