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二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因克隆、表达分析及RNA干扰

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略词中英文对照第11-13页
第一章 文献综述第13-21页
 1 Bt抗性简介第13-17页
   ·Bt的发现和研究历史第13-14页
   ·Bt杀虫晶体蛋白分类第14页
   ·Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机理第14-15页
   ·Bt在农业害虫防治中的应用第15页
   ·Bt抗性的产生第15-17页
 2 荧光实时定量PCR第17-18页
   ·荧光实时定量PCR技术原理第17-18页
   ·荧光实时定量PCR技术中内参基因选择重要性第18页
 3 RNA干扰技术第18-21页
   ·RNAi的发现第18-19页
   ·RNAi的机制第19-20页
   ·RNAi技术的应用第20-21页
第二章 二化螟中五个重要持家基因的稳定性分析第21-33页
 摘要第21页
 1 材料与方法第21-26页
   ·主要试剂和仪器设备第21-22页
   ·供试昆虫的饲养第22页
   ·候选内参基因的选择以及引物设计第22-23页
   ·总RNA的提取第23-24页
   ·cDNA第一链的合成第24-25页
   ·qRT-PCR第25-26页
   ·数据分析第26页
 2 结果与分析第26-31页
   ·持家基因的确定第26页
   ·持家基因表达量的变化第26-27页
   ·在二化螟不同发育阶段持家基因的稳定性分析第27-28页
   ·在二化螟不同组织中持家基因的稳定性分析第28-29页
   ·在二化螟所有样品中持家基因的稳定性分析第29-31页
 3 讨论第31-33页
第三章 二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因全长克隆及序列分析第33-47页
 摘要第33页
 1 材料与方法第33-40页
   ·主要试剂和仪器设备第33-34页
   ·供试昆虫的饲养第34页
   ·二化螟中与Bt相关基因的预测第34页
   ·引物设计第34页
   ·总RNA的提取第34-35页
   ·cDNA的合成第35页
   ·RACE cDNA的合成第35-36页
   ·PCR反应第36-37页
   ·分子克隆第37-40页
 2 结果与分析第40-44页
   ·基因片段验证分析第40页
   ·受体蛋白基因的RACE扩增分析第40-44页
   ·四类Bt杀虫晶体蛋白受体基因的进化分析第44页
 3 讨论第44-47页
第四章 二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因在不同龄期中肠组织中的表达分析第47-57页
 摘要第47页
 1 材料与方法第47-50页
   ·主要试剂和仪器设备第47-48页
   ·供试昆虫的饲养第48页
   ·引物设计第48-49页
   ·总RNA的提取第49页
   ·cDNA第一链的合成第49页
   ·qRT-PCR检测各个基因mRNA水平表达量变化第49-50页
 2 结果第50-55页
   ·钙粘蛋白在二化螟不同发育阶段中肠组织中表达量分析第50-51页
   ·氨肽酶在二化螟不同发育阶段中肠组织的表达量分析第51-53页
   ·碱性磷酸酶在二化螟不同发育阶段中肠中表达量分析第53页
   ·糖脂转移酶在二化螟不同发育阶段中肠中表达量分析第53-55页
 3 讨论第55-57页
第五章 二化螟钙粘蛋白在不同组织中的表达分析及RNA干扰第57-71页
 摘要第57页
 1 材料与方法第57-60页
   ·试虫来源及饲养第57-58页
   ·主要试剂和仪器第58页
   ·二化螟两个钙粘蛋白干扰片段位置第58-59页
   ·二化螟siRNA的喂食第59页
   ·RNA提取及定量PCR分析第59-60页
   ·数据统计第60页
 2 结果第60-68页
   ·两个钙粘蛋白在不同组织中的表达量分析第60-61页
   ·siRNA的喂食时间确定第61-62页
   ·RNA干扰后的钙粘蛋白基因表达量变化第62-63页
   ·RNAi干扰后二化螟取食转基因水稻的存活率变化第63-68页
 3 讨论第68-71页
全文总结第71-73页
附录:利用实时定量PCR评价并验证三种鳞翅目昆虫中候选持家基因的稳定性第73-85页
 摘要第73页
 1 材料与方法第73页
 2 结果与分析第73-83页
   ·持家基因的确定第73-74页
   ·持家基因表达量的变化第74-76页
   ·在不同发育阶段持家基因的稳定性分析第76-77页
   ·在不同组织中持家基因的稳定性分析第77-78页
   ·在所有样品中持家基因的稳定性分析第78-80页
   ·选择不同持家基因对荧光定量PCR数据结果的影响第80-83页
 3 讨论第83-85页
参考文献第85-93页
攻读硕士学位期间学术论文的发表情况第93-95页
致谢第95页

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