中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
目录 | 第9-11页 |
中英文缩略词对照表 | 第11-13页 |
第一章 综述 | 第13-29页 |
1 SLC38 家族(Solute carrier family 38)的钠偶联中性氨基酸转运蛋白 | 第13-18页 |
·SLC38 基因家族的发现 | 第13-14页 |
·SLC38 基因家族的分布及分类 | 第14-15页 |
·SLC38 基因家族的分布 | 第14页 |
·SLC38 基因家族的分类 | 第14-15页 |
·SLC38 基因家族的功能 | 第15-18页 |
·参与大脑中谷氨酸/GABA-谷氨酰胺循环 | 第15-16页 |
·SNAT3 在肝脏氨解毒中的作用 | 第16-17页 |
·SNAT2 在肝脏中对糖异生的作用 | 第17页 |
·SNAT3-介导的谷氨酸转运以及肾脏酸中毒反应 | 第17-18页 |
2 SNAT2 的结构功能研究现状 | 第18-22页 |
·SNAT2 的发现 | 第18-19页 |
·SNAT2 的分布 | 第19页 |
·SNAT2 功能研究及调控 | 第19-20页 |
·SNAT2 结构与分子机制研究现状 | 第20-22页 |
·SNAT2 结构研究现状 | 第20-21页 |
·SNAT2 分子机制研究现状 | 第21-22页 |
3 膜拓扑结构的研究 | 第22-27页 |
·已知拓扑结构的膜蛋白 | 第22-26页 |
·人类乳腺癌抗性蛋白 BCRP 的膜拓扑结构 | 第22-23页 |
·中性氨基酸转运蛋白 SNAT4 的膜拓扑结构 | 第23-24页 |
·通道样基因 1 编码转运蛋白 TMC1 的膜拓扑结构 | 第24-26页 |
·糖基化位点 | 第26-27页 |
4 SNAT2 拓扑结构研究的意义 | 第27-29页 |
第二章 EGFP-SNAT2 融合蛋白在真核表达载体中的构建和鉴定 | 第29-40页 |
0 前言 | 第29-30页 |
1 材料和方法 | 第30-35页 |
·材料 | 第30-31页 |
·质粒、菌株和细胞株 | 第30页 |
·主要试剂 | 第30-31页 |
·方法 | 第31-35页 |
·引物的设计与合成 | 第31页 |
·EGFP 基因 PCR 扩增、酶切及连接 | 第31-32页 |
·载体的构建、终止子突变及鉴定 | 第32-33页 |
·转染及激光共聚焦显微镜检测蛋白表达 | 第33页 |
·蛋白提取及 Western Blot | 第33-35页 |
2 结果 | 第35-39页 |
·pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2 质粒载体构建 | 第35-37页 |
·pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2 载体表达鉴定 | 第37-39页 |
3 讨论 | 第39-40页 |
第三章 SNAT2 中糖基化位点的确定 | 第40-48页 |
0 前言 | 第40-41页 |
1 材料和方法 | 第41-44页 |
·材料 | 第41-42页 |
·质粒、菌株和细胞株 | 第41页 |
·主要试剂 | 第41-42页 |
·方法 | 第42-44页 |
·突变引物的设计和合成 | 第42页 |
·定点突变 | 第42-43页 |
·蛋白提取及 Western Blot | 第43-44页 |
2 结果 | 第44-46页 |
·验证预测的糖基化位点 N258,N272 | 第44-45页 |
·验证新发现的糖基化位点 N254 | 第45-46页 |
3 讨论 | 第46-48页 |
第四章 SNAT2 中 N 端 C 端的膜定位 | 第48-56页 |
0 前言 | 第48页 |
1 材料和方法 | 第48-51页 |
·材料 | 第48-49页 |
·质粒、菌株和细胞株 | 第48-49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·方法 | 第49-51页 |
·引物的设计与合成 | 第49-50页 |
·HA-SNAT2 基因 PCR 扩增、酶切及连接 | 第50页 |
·载体的构建及鉴定 | 第50页 |
·蛋白提取及 Western Blot | 第50-51页 |
·细胞免疫荧光 | 第51页 |
2 结果 | 第51-54页 |
·HA-SNAT2 融合蛋白在真核表达载体中的构建和鉴定 | 第51-54页 |
·确定 N 端 C 端的定位 | 第54页 |
3 讨论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-62页 |
研究小结 | 第62-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
附录 | 第64页 |