| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-28页 |
| ·植物基因启动子的结构特点和研究方法 | 第15-18页 |
| ·启动子的定义和基本结构 | 第15页 |
| ·植物基因启动子的种类 | 第15-18页 |
| ·组成型启动子 | 第15-16页 |
| ·诱导型启动子 | 第16-17页 |
| ·组织或器官特异性启动子 | 第17-18页 |
| ·木质素和类黄酮概述 | 第18-21页 |
| ·木质素 | 第18-19页 |
| ·类黄酮 | 第19页 |
| ·苯丙烷类代谢途径与木质素和类黄酮的合成 | 第19-21页 |
| ·植物4香豆酸：辅酶A连接酶研究进展 | 第21-23页 |
| ·植物4CL启动子功能研究 | 第23-24页 |
| ·植物体内活性氧的产生与清除 | 第24-26页 |
| ·活性氧的产生 | 第25页 |
| ·活性氧的清除 | 第25-26页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶简介 | 第26-28页 |
| 2 毛白杨4-香豆酸：辅酶A连接酶基因家族启动子克隆 | 第28-49页 |
| ·材料与方法 | 第28-33页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·质粒和菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第29页 |
| ·4CL基因家族启动子及基因5′端序列片段的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·DNA片断的回收 | 第30-31页 |
| ·DNA片段与克隆载体的连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·质粒转化大肠杆菌感受态 | 第31页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第31-32页 |
| ·质粒酶切 | 第32页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组子的PCR检测和测序 | 第32页 |
| ·4CL基因家族启动子序列的获得和克隆载体的构建 | 第32-33页 |
| ·启动子的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·实验结果与分析 | 第33-47页 |
| ·毛白杨4CL基因家族启动子的克隆 | 第33-40页 |
| ·毛白杨4CL基因家族启动子的序列分析 | 第40-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 3 毛白杨4CL启动子在转基因烟草中驱动的特异性表达 | 第49-66页 |
| ·材料方法 | 第49-53页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·质粒和菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·毛白杨4CL启动子植物表达载体构建 | 第50页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第51页 |
| ·转基因烟草的筛选和鉴定 | 第51-52页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第52页 |
| ·GUS活性荧光定量测定 | 第52-53页 |
| ·实验结果与分析 | 第53-63页 |
| ·毛白杨4CL基因家族启动子植物表达载体构建 | 第53-54页 |
| ·毛白杨4CL基因家族启动子植物表达载体转基因烟草的获得 | 第54-56页 |
| ·转基因植株的抗性筛选 | 第54-55页 |
| ·转基因植株的检测 | 第55-56页 |
| ·Pto4CL2p～Pto4CL5p在转基因烟草中的特异性表达 | 第56-62页 |
| ·Pto4CL2p～Pto4CL5p启动GUS基因表达量分析 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 4 Pto4CL2p结构和功能区域的分析 | 第66-85页 |
| ·材料方法 | 第66-71页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66页 |
| ·质粒和菌株 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-71页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失序列的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失片段克隆载体的构建 | 第67页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失片段植物表达载体的构建 | 第67页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第67页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第67页 |
| ·转基因烟草的筛选和PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交鉴定 | 第68-69页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第69页 |
| ·GUS活性荧光定量测定 | 第69页 |
| ·植物材料核蛋白的提取 | 第69页 |
| ·EMSA实验鉴定核蛋白与DNA结合活性 | 第69-71页 |
| ·实验结果与分析 | 第71-83页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失序列的获得 | 第71页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失片段植物表达载体构建 | 第71-73页 |
| ·Pto4CL2p 5′缺失片段植物表达载体转基因烟草的获得 | 第73-75页 |
| ·Pto4CL2不同长度5′缺失片段在转基因烟草中表达模式的差异 | 第75-78页 |
| ·-266～-239区域中的AC元件调控Pto4CL2p的组织特异性表达 | 第78-81页 |
| ·-252～-239区域中的ABRE参与调节Pto4CL2启动子的基础表达 | 第81-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 5 毛白杨抗APX的原核表达及活性测定 | 第85-102页 |
| ·材料方法 | 第85-88页 |
| ·实验材料 | 第85-86页 |
| ·植物材料 | 第85页 |
| ·主要仪器设备 | 第85页 |
| ·质粒和菌株 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·APX基因的序列分析、蛋白结构预测 | 第86页 |
| ·APX重组蛋白的原核表达载体构建 | 第86页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第86-87页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第87页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第87页 |
| ·PtoAPX重组蛋白酶学分析 | 第87-88页 |
| ·实验结果与分析 | 第88-99页 |
| ·PtoAPX2基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第88-91页 |
| ·PtoAPX6基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第91-93页 |
| ·PtoAPX7基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第93-95页 |
| ·PtoAPX重组蛋白原核表达载体的构建 | 第95-96页 |
| ·PtoAPX重组蛋白原核表达与纯化 | 第96页 |
| ·PtoAPX酶学特性分析 | 第96-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 6 毛白杨APX抗原多肽的合成和多克隆抗体制备 | 第102-112页 |
| ·材料方法 | 第102-104页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·动物和植物材料 | 第102页 |
| ·主要仪器设备 | 第102页 |
| ·质粒和菌株 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-104页 |
| ·抗原多肽的设计 | 第102-103页 |
| ·抗原多肽的合成 | 第103页 |
| ·抗血清制备 | 第103页 |
| ·抗原亲和纯化 | 第103-104页 |
| ·Western blot检测抗原与抗体的特异性结合 | 第104页 |
| ·实验结果 | 第104-110页 |
| ·抗原多肽的设计 | 第104-105页 |
| ·抗血清免疫原性检测 | 第105-110页 |
| ·间接ELISA检测抗血清效价 | 第105-107页 |
| ·Western blot分析抗血清的免疫特异性 | 第107-108页 |
| ·亲和纯化后的抗体检测 | 第108-110页 |
| ·讨论 | 第110-112页 |
| 7 PtoAPX6和PtoAPX7的亚细胞定位 | 第112-119页 |
| ·材料方法 | 第112-114页 |
| ·实验材料 | 第112页 |
| ·植物材料 | 第112页 |
| ·主要仪器设备 | 第112页 |
| ·质粒和菌株 | 第112页 |
| ·主要试剂 | 第112页 |
| ·实验方法 | 第112-114页 |
| ·胶体金免疫电镜检测 | 第112-113页 |
| ·PtoAPX6和PtoAPX7与绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白植物表达载体构建 | 第113-114页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第114页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第114页 |
| ·转基因烟草的筛选和PCR鉴定 | 第114页 |
| ·转基因烟草荧光观察 | 第114页 |
| ·结果与分析 | 第114-118页 |
| ·PtoAPX亚细胞定位预测 | 第114-115页 |
| ·胶体金免疫电镜观察PtoAPX6和PtoAPX7亚细胞定位 | 第115-116页 |
| ·PtoAPX6和PtoAPX7与GFP融合蛋白植物表达载体构建 | 第116页 |
| ·PtoAPX6和PtoAPX7在转基因烟草中的亚细胞定位 | 第116-118页 |
| ·讨论 | 第118-119页 |
| 8 PtoAPX7在烟草中过量表达调控抗盐性研究 | 第119-126页 |
| ·材料方法 | 第119-120页 |
| ·实验材料 | 第119页 |
| ·植物材料 | 第119页 |
| ·主要仪器设备 | 第119页 |
| ·质粒和菌株 | 第119页 |
| ·主要试剂 | 第119页 |
| ·实验方法 | 第119-120页 |
| ·PtoAPX7正义植物表达载体转化烟草 | 第119页 |
| ·烟草苗的盐胁迫处理 | 第119页 |
| ·叶片含水量的测定 | 第119-120页 |
| ·丙二醛含量测定 | 第120页 |
| ·H_2O_2含量测定 | 第120页 |
| ·酶液的提取 | 第120页 |
| ·APX活性测定 | 第120页 |
| ·SOD活性测定 | 第120页 |
| ·实验结果与分析 | 第120-124页 |
| ·转基因植株外源PtoAPX7基因的PCR和Southern杂交鉴定 | 第120-121页 |
| ·盐处理对野生型和PtoAPX7转基因烟草相对含水量的影响 | 第121-122页 |
| ·盐处理对野生型和PtoAPX7转基因烟草MDA含量的影响 | 第122-123页 |
| ·盐处理对野生型和PtoAPX7转基因烟草H_2O_2含量的影响 | 第123页 |
| ·盐处理对野生型和PtoAPX7转基因烟草SOD和APX活性的影响 | 第123-124页 |
| ·讨论 | 第124-126页 |
| 9 结论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-144页 |
| 缩略词表 | 第144-146页 |
| 个人简介 | 第146-148页 |
| 导师简介 | 第148-152页 |
| 获得成果目录 | 第152-154页 |
| 致谢 | 第154页 |
