AOC和ipt基因转录融合转化热研5号柱花草
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| ·土壤盐渍化 | 第11页 |
| ·盐胁迫对植物的伤害 | 第11-13页 |
| ·Na~+毒害 | 第11-12页 |
| ·吸水困难 | 第12页 |
| ·生理紊乱 | 第12-13页 |
| ·植物耐盐性研究进展 | 第13-14页 |
| ·耐盐机理的研究 | 第13-14页 |
| ·离子调节机制 | 第13页 |
| ·渗透调节机制 | 第13-14页 |
| ·牧草耐盐性研究 | 第14-17页 |
| ·牧草耐盐生理生化研究 | 第14-15页 |
| ·盐胁迫对牧草光合作用的影响 | 第14页 |
| ·盐胁迫对抗氧化系统的影响 | 第14-15页 |
| ·盐胁迫对膜透性及渗透调节物质的影响 | 第15页 |
| ·牧草的耐盐性选育 | 第15-17页 |
| ·杂交育种 | 第16页 |
| ·耐盐牧草品种筛选 | 第16页 |
| ·牧草的分子育种 | 第16-17页 |
| ·柱花草研究进展 | 第17-19页 |
| ·柱花草的生物学特征 | 第17页 |
| ·柱花草的用途 | 第17-18页 |
| ·柱花草组织培养研究 | 第18-19页 |
| ·转基因技术在柱花草上的应用 | 第19页 |
| ·AOC-ipt基因转录融合转化热研5号转化草 | 第19-21页 |
| ·AOC基因 | 第19-20页 |
| ·ipt基因 | 第20页 |
| ·GUS基因 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的意义及技术路线 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-34页 |
| ·材料和试剂 | 第23-24页 |
| ·菌株和载体 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·生化试剂 | 第23页 |
| ·本实验所用引物 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·菌液制备 | 第24-25页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第24页 |
| ·转化农杆菌 | 第24-25页 |
| ·阳性克隆筛选与鉴定 | 第25页 |
| ·PCR体系和反应条件 | 第25页 |
| ·热研5号柱花草无菌苗的培养 | 第25-26页 |
| ·柱花草组织培养体系的优化 | 第26-27页 |
| ·最佳外植体的确定 | 第26页 |
| ·最佳愈伤组织诱导培养基确定 | 第26页 |
| ·芽分化与生根培养基 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导柱花草子叶转化的因子优化 | 第27-29页 |
| ·农杆菌介导柱花草子叶转化方法 | 第27页 |
| ·潮霉素有效浓度的筛选试验 | 第27页 |
| ·羧苄青霉素钠对子叶诱导愈伤组织的影响 | 第27页 |
| ·菌种对基因转化的影响 | 第27页 |
| ·农杆菌菌液浓度对基因转化的影响 | 第27-28页 |
| ·浸染时间对基因转化的影响 | 第28页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)的浓度对基因转化的影响 | 第28页 |
| ·共培养温度对基因转化的影响 | 第28页 |
| ·共培养时间对基因转化影响 | 第28页 |
| ·GUS组织化学染色分析 | 第28-29页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第29-30页 |
| ·柱花草基因组DNA的快速微量提取法 | 第29页 |
| ·PCR检测 | 第29页 |
| ·目的片段的回收 | 第29-30页 |
| ·回收产物与T-Vector连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第30页 |
| ·DNA序列测定与分析 | 第30页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第30-33页 |
| ·转基因阳性柱花草植株的RNA提取方法 | 第30-32页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| ·反转录产物的检测 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第33页 |
| ·炼苗与移栽 | 第33-34页 |
| ·炼苗方法的比较 | 第33页 |
| ·不同移栽基质对移栽成活率的影响 | 第33页 |
| ·不同时期组培苗对移栽成活率的影响 | 第33页 |
| ·移栽后幼苗不同管理方法对移栽成活率的影响 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-52页 |
| ·柱花草组织培养体系的优化 | 第34-36页 |
| ·最佳外植体的确定 | 第34-35页 |
| ·愈伤组织诱导培养基的筛选 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导柱花草子叶转化的因子优化 | 第36-43页 |
| ·潮霉素有效浓度的筛选 | 第36-38页 |
| ·羧苄青霉素对子叶诱导愈伤组织的影响 | 第38页 |
| ·农杆菌菌种对基因转化的影响 | 第38-39页 |
| ·农杆菌菌液浓度对基因转化的影响 | 第39-40页 |
| ·农杆菌浸染时间对基因转化的影响 | 第40-41页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对转化率的影响 | 第41页 |
| ·共培养温度对基因转化的影响 | 第41-42页 |
| ·共培养时间对基因转化的影响 | 第42页 |
| ·pVKH-AOC-ipt-pA转化柱化草 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第43-52页 |
| ·转基因热研5号柱花草PCR检测 | 第43-46页 |
| ·目的基因序列blast分析 | 第46-47页 |
| ·转基因热研5号柱花草RT-PCR检测 | 第47-49页 |
| ·热研5号柱花草RNA提取 | 第47-48页 |
| ·反转录cDNA的质量检测 | 第48-49页 |
| ·反转录产物的目的片段检测 | 第49页 |
| ·炼苗与移栽 | 第49-52页 |
| ·炼苗方法的比较 | 第49页 |
| ·移栽基质的选择 | 第49-50页 |
| ·组培苗培养时间对移栽成活率的影响 | 第50-51页 |
| ·移栽后幼苗的管理对成活率的影响 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-57页 |
| ·热研5号柱花草组织培养和遗传转化体系的优化 | 第52-53页 |
| ·热研5号柱花草最佳外植体选择 | 第52页 |
| ·热研5号柱花草愈伤组织诱导培养基的选择 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导柱花草子叶转化的因子优化 | 第53-55页 |
| ·基因转化中的抗生素选择 | 第53-54页 |
| ·农杆菌菌种、菌液浓度和侵染时间对基因转化的影响 | 第54页 |
| ·乙酰丁香酮对基因转化的影响 | 第54-55页 |
| ·共培养对基因转化的影响 | 第55页 |
| ·热研5号柱花草转基因植株的检测与鉴定 | 第55-56页 |
| ·柱花草组培苗的移栽 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录1 | 第64-65页 |
| 附录2 缩写词表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
