| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 图表目录 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-20页 |
| ·选题的目的和意义 | 第13-14页 |
| ·Apoptin | 第14-16页 |
| ·PTD 序列 | 第16-20页 |
| 第1章 实验仪器、实验试剂及基本实验方法 | 第20-28页 |
| ·实验药品和生化试剂 | 第20-21页 |
| ·实验器材 | 第21页 |
| ·实验常用试剂配制 | 第21-22页 |
| ·实验室常用的基本实验方法 | 第22-28页 |
| ·提取质粒 | 第22页 |
| ·DNA 产物纯化 | 第22-23页 |
| ·DNA 片段回收 | 第23页 |
| ·制备感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·挑菌保存 | 第24-25页 |
| ·凝胶电泳 | 第25页 |
| ·SDS—PAGE 凝胶制备 | 第25-26页 |
| ·样品处理与 SDS-PAGE 电泳 | 第26-27页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第27-28页 |
| 第2章 Apoptin 基因的获得及其原核表达载体的构建 | 第28-36页 |
| ·实验目的 | 第28页 |
| ·实验设计 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·Apoptin 全序列引物设计 | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增 Apoptin 基因 | 第29页 |
| ·T-A 克隆保存 Apoptin 基因并测序 | 第29-30页 |
| ·PCR 获得的 Apoptin 序列与数据库收录的 Apoptin 序列比对 | 第30页 |
| ·构建 pET-30a-Apoptin 原核表达质粒 | 第30-31页 |
| ·pET-30a-Apoptin 质粒的原核表达 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-35页 |
| ·Apoptin 序列的获得 | 第32页 |
| ·PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·序列测定及比对 | 第33页 |
| ·pET-30a-Apoptin 构建结果 | 第33-34页 |
| ·pET-30a-Apoptin 质粒的原核表达结果 | 第34-35页 |
| ·本章小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第3章 TAT 序列的获得及 pET-30a-TAT-GFP 质粒的构建和表达 | 第36-46页 |
| ·实验目的 | 第36页 |
| ·实验设计 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·人工合成 TAT 序列 | 第37页 |
| ·构建 pET-30a-TAT 质粒 | 第37-38页 |
| ·构建 pET-30a-TAT-EGFP 质粒和 pET-30a -EGFP 质粒 | 第38-39页 |
| ·TAT-EGFP 融合蛋白的原核表达及纯化 | 第39-40页 |
| ·TAT-EEGFP 融合蛋白体外穿膜实验 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-45页 |
| ·TAT 双链合成结果 | 第40-41页 |
| ·EGFP 序列扩增 | 第41-42页 |
| ·构建的 pET-30a-TAT-EGFP 质粒 PCR 验证 | 第42页 |
| ·TAT-EGFP 基因的诱导表达与鉴定 | 第42-43页 |
| ·TAT-EGFP 亲和纯化 | 第43-44页 |
| ·TAT 膜穿透活性研究 | 第44-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-46页 |
| 第 4 章 TAT-Apoptin 融合蛋白原核表达系统的构建、可溶性表达、纯化及活性检测 | 第46-62页 |
| ·实验目的 | 第46页 |
| ·实验设计 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·构建 pET-30a-TAT-Apoptin 质粒和 pGEX-6p-1-TAT-Apoptin 质粒 | 第47页 |
| ·原核表达 TAT-Apoptin 融合蛋白 | 第47-48页 |
| ·优化融合蛋白原核可溶性表达的条件 | 第48页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白体外活性检测 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-60页 |
| ·构建 pET-30a-TAT-Apoptin 质粒 | 第50-52页 |
| ·构建 pGEX-6p-1-TAT-Apoptin 质粒的结果 | 第52-53页 |
| ·原核表达 TAT-Apoptin 融合蛋白结果 | 第53-54页 |
| ·摸索融合蛋白原核可溶性表达的条件 | 第54-58页 |
| ·TAT-Apoptin 融合蛋白纯化结果 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白活性 MTT 检测结果 | 第59-60页 |
| ·本章小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第5章 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
