| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-16页 |
| 目录 | 第16-18页 |
| 主要缩略词简表 | 第18-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-24页 |
| LRRC4与脑胶质瘤 | 第19页 |
| miRNA与肿瘤 | 第19-21页 |
| 转录因子、miRNA与基因之间的相互调控 | 第21-22页 |
| miRNA、DNA甲基化转移酶与基因之间的相互调控 | 第22页 |
| 本研究技术思路 | 第22-23页 |
| 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-42页 |
| 1 材料 | 第24-31页 |
| ·细胞系和组织样本 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-42页 |
| ·细胞RNA制备 | 第31-32页 |
| ·细胞蛋白抽提 | 第32-33页 |
| ·Western blot检测 | 第33-34页 |
| ·miRNA和si-RNA转染目的细胞 | 第34页 |
| ·MTT | 第34页 |
| ·流式细胞分析(FAM)细胞周期与细胞凋亡的变化 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 | 第35页 |
| ·免疫组化检测 | 第35-36页 |
| ·免疫荧光试验 | 第36页 |
| ·原位杂交检测miRNA的表达 | 第36-37页 |
| ·免疫组化和原位杂交结果分析 | 第37页 |
| ·细胞划痕实验 | 第37页 |
| ·Transwell侵袭实验 | 第37-38页 |
| ·miRNA的靶基因验证 | 第38页 |
| ·EMSA检测(按照试剂盒说明书操作) | 第38-39页 |
| ·ChIP检测(按照试剂盒说明书操作) | 第39-40页 |
| ·HPLC-DAD检测全基因组甲基化(GDM analysis) | 第40页 |
| ·Gene-miRNA-Gene调控网络数据分析 | 第40-41页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第41页 |
| ·统计学分析 | 第41-42页 |
| 第三章 结果 | 第42-110页 |
| 第一部分 以LRRC4为核心的LRRC4-miRNA-靶基因调控网络的构建 | 第42-55页 |
| ·LRRC4所调控的miRNA的筛选 | 第42-43页 |
| ·运用qRT-PCR对miRNA芯片结果进行验证 | 第43-44页 |
| ·LRRC4所调控miRNA的靶基因功能显著性分析：GO-Analysis | 第44-45页 |
| ·构建LRRC4所调控miRNA的靶基因功能调控网络：miRNA-GO调控网络 | 第45-47页 |
| ·构建以LRRC4为核心的LRRC4-miRNA-靶基因调控网络图 | 第47-48页 |
| ·LRRC4所调控的miRNA在胶质瘤细胞和组织中的表达以及与胶质瘤患者的预后分析 | 第48-52页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤实验进一步证实LRRC4下调miR-182、miR-381的表达,上调miR-185的表达 | 第52-55页 |
| 第二部分 miR-182或miR-381作为胶质瘤治疗潜在生物靶点的作用机制及LRRC4-AP-2-miR-182-LRRC4调控环路的构建 | 第55-88页 |
| ·miR-182、miR-381是胶质瘤治疗的潜在生物靶点 | 第55-62页 |
| ·miR-182、miR-381作为胶质瘤生物靶点的作用机制 | 第62-85页 |
| ·LRRC4-AP-2-miR-182-LRRC4调控环路的构建 | 第85-88页 |
| 第三部分 miR-185通过抑制靶基因DNMT1、CDC42和RhoA发挥抑瘤功能及LRRC4-miR-185/SP1-DNMT1-LRRC4调控环路的构建 | 第88-110页 |
| ·过表达miR-185抑制胶质瘤细胞生长、增殖和侵袭 | 第88-91页 |
| ·miR-185通过靶向DNMT1调控全基因组甲基化,恢复LRRC4等高甲基化基因的表达 | 第91-99页 |
| ·miR-185通过调控靶基因CDC42和RhoA间接下调VEGFA的表达抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭 | 第99-107页 |
| ·LRRC4-miR-185/SP1-DNMT1-LRRC4调控环路的构建 | 第107-110页 |
| 第四章 讨论 | 第110-122页 |
| 第一部分 以LRRC4为核心的LRRC4-miRNA-靶基因调控网络的构建 | 第110-112页 |
| 第二部分 miR-182或miR-381作为胶质瘤治疗潜在生物靶点的作用机制及LRRC4-AP-2-miR-182-LRRC4调控环路的构建 | 第112-115页 |
| 第三部分 miR-185通过抑制靶基因DNMT1、CDC42和RhoA发挥抑瘤功能及LRRC4-miR-185/SP1-DNMT1-LRRC4调控环路的构建 | 第115-122页 |
| 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-132页 |
| 综述 | 第132-143页 |
| 参考文献 | 第139-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第144-146页 |
