| 图表目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文略语表 | 第12-15页 |
| 第一部分 甲型H1N1流感病毒诱导呼吸道上皮细胞凋亡机理研究 | 第15-54页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 1. 实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·实验试剂 | 第17页 |
| ·主要生化试剂和抗体 | 第17-18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·主要仪器及设备 | 第18-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-26页 |
| ·病毒接种回收及滴度测定 | 第20-22页 |
| ·MTS方法测定细胞活性 | 第22页 |
| ·用流感病毒感染细胞Western blot检测样品处理 | 第22页 |
| ·Western blot检测 | 第22-23页 |
| ·TUNEL检测细胞凋亡 | 第23-24页 |
| ·流感病毒感染细胞实验 | 第24页 |
| ·流感病毒感染细胞后的免疫荧光检测 | 第24-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-48页 |
| ·A/Wenshan H1N1引起CNE-2Z细胞死亡 | 第26页 |
| ·A/Wenshan H1N1引起A549细胞死亡 | 第26-27页 |
| ·A/Wenshan H1N1和A/Jinnan H1N1病毒在A549和CNE-2Z细胞中的复制能力检测 | 第27-28页 |
| ·Caspase 3依赖性的凋亡途径参与A/Wenshan H1N1引起的CNE-2Z细胞死亡 | 第28-30页 |
| ·Caspase 3依赖性的凋亡途径参与A/Wenshan H1N1引起的A549细胞死亡 | 第30-32页 |
| ·在CNE-2Z细胞中Wenshan H1N1进入细胞效率高于Jinnan H1N1 | 第32-38页 |
| ·Jinnan H1N1在高滴度MOI 10.0时对于细胞生存率的影响 | 第38-39页 |
| ·A/Wenshan H1N1病毒全基因序列测定 | 第39-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第二部分 PI4KB调控SARS冠状病毒细胞进入机理研究 | 第54-91页 |
| 前言 | 第55-57页 |
| 1. 实验材料 | 第57-62页 |
| ·质粒 | 第57页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·细胞株 | 第57页 |
| ·主要试剂与抗体 | 第57页 |
| ·细胞培养及转染试剂 | 第57-58页 |
| ·SiRNA | 第58页 |
| ·主要仪器设备 | 第58-59页 |
| ·主要溶液配制 | 第59-62页 |
| 2. 实验方法 | 第62-72页 |
| ·细胞活力实验 | 第62页 |
| ·RNA提取和荧光定量PCR | 第62-65页 |
| ·假病毒包装与感染 | 第65-66页 |
| ·siRNA转染Vero E6细胞 | 第66页 |
| ·抑制剂对SARS假病毒进入细胞的影响 | 第66页 |
| ·Western blot检测 | 第66-68页 |
| ·RNA的提取和定量RT-PCR实验 | 第68页 |
| ·利用流式检测细胞表面ACE2表达水平 | 第68页 |
| ·免疫荧光检测细胞内PI4P及flag标记的Sac 1 | 第68-69页 |
| ·蛋白纯化 | 第69页 |
| ·SARS假病毒、S318-510Fc的细胞结合实验 | 第69-70页 |
| ·SARS假病毒的细胞内吞实验 | 第70页 |
| ·Vero E6瞬时转染flag-Sac1 | 第70页 |
| ·胰酶处理缓解抑制剂对SARS假病毒进入Vero E6的抑制实验 | 第70页 |
| ·Vero E6细胞内PI4P的提取及测定 | 第70-72页 |
| 3 实验结果 | 第72-86页 |
| ·LY294002抑制SRAS假病毒进入Vero E6细胞 | 第72-73页 |
| ·Wortmannin抑制SRAS假病毒进入Vero E6细胞 | 第73-75页 |
| ·PI4KB的敲减抑制SARS假病毒进入细胞 | 第75-77页 |
| ·Sac1过表达可以抑制SARS假病毒进入Vero E6 | 第77-79页 |
| ·Vero E6细胞内的PI4P水平由PI4KB和Sac1调控 | 第79-81页 |
| ·PI4KB在SARS假病毒进入的后期阶段发挥作用 | 第81-83页 |
| ·TPCK-trypsin处理可以缓解PI4KB的抑制对SARS假病毒进入的影响 | 第83-86页 |
| 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第三部分 利用SARS-CoV DNA表达质粒制备中和抗体 | 第91-113页 |
| 前言 | 第92-93页 |
| 1 实验材料 | 第93-98页 |
| ·质粒 | 第93页 |
| ·菌株 | 第93页 |
| ·细胞株及动物 | 第93-94页 |
| ·主要仪器设备 | 第94页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液及DNA Marker | 第94页 |
| ·主要化学试剂 | 第94-95页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第95页 |
| ·试剂盒 | 第95页 |
| ·主要溶液配方 | 第95-98页 |
| 2 实验方法 | 第98-106页 |
| ·合成经过优化的SARS-CoV的Spike蛋白的全基因 | 第98-100页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第100-101页 |
| ·重组质粒DNA浓度的测定 | 第101页 |
| ·DNA的线性化及纯化回收 | 第101页 |
| ·贴壁细胞培养 | 第101页 |
| ·稳定表达细胞株的构建 | 第101-102页 |
| ·细胞冻存 | 第102页 |
| ·细胞复苏 | 第102页 |
| ·细胞裂解 | 第102-103页 |
| ·Western Blotting检测方法 | 第103-104页 |
| ·SARS-CoV刺突蛋白S1190-Fc及对照Fc蛋白的制备 | 第104页 |
| ·假病毒的包装 | 第104页 |
| ·假病毒滴度测定 | 第104-105页 |
| ·spike表达质粒免疫小鼠 | 第105页 |
| ·抗血清中和SARS假病毒细胞进入实验 | 第105-106页 |
| 3 实验结果 | 第106-111页 |
| ·S1190-Fc及Fc蛋白的表达纯化 | 第106页 |
| ·SARS假病毒的包装 | 第106-107页 |
| ·SARS假病毒的滴度测定 | 第107-108页 |
| ·S1190抗血清可以有效中和SARS假病毒进入HEK293E/ACE2-Myc细胞 | 第108-109页 |
| ·S1190抗血清可以结合spike的S318-510区域 | 第109页 |
| ·S318-510蛋白可以减弱S1190抗血清对SARS假病毒细胞进入的抑制 | 第109-111页 |
| 讨论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-113页 |
| 综述 1-The Origin,Epidemiology,Transmission,Replication and Pathogenesis of the New PandemicH1N1 Influenza | 第113-121页 |
| Reference | 第117-121页 |
| 综述 2-病毒与细胞自噬 | 第121-127页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 个人简历 | 第128-129页 |
