| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-36页 |
| ·结构特异性内切酶1 | 第10-12页 |
| ·FEN1研究进展 | 第12-30页 |
| ·FEN1蛋白与DNA底物结合的晶体结构模型 | 第12-15页 |
| ·FEN1与3’分枝的结合 | 第12-13页 |
| ·FEN1与5’分枝的结合 | 第13-15页 |
| ·FEN1的基本特征与突变体研究 | 第15-16页 |
| ·FEN1的蛋白互作与功能 | 第16-19页 |
| ·FEN1与PCNA相互作用的研究 | 第19-20页 |
| ·FEN1的体内调节机制 | 第20-23页 |
| ·FEN1的亚细胞定位 | 第20-21页 |
| ·FEN1的翻译后修饰 | 第21-23页 |
| ·FEN1生化功能的研究进展 | 第23-29页 |
| ·FEN1与冈崎片段成熟途径 | 第23-24页 |
| ·FEN1与碱基切除修复途径 | 第24-25页 |
| ·FEN1与核苷酸切除修复途径 | 第25-26页 |
| ·FEN1参与其它DNA代谢的途径 | 第26-29页 |
| ·E160D FEN1突变体的研究 | 第29-30页 |
| ·肺癌 | 第30-32页 |
| ·苯并芘 | 第32-34页 |
| 本文的理论依据和研究意义 | 第34-36页 |
| 第2章 细胞周期进程中程序性的翻译后修饰调控FEN1的降解 | 第36-59页 |
| 引言 | 第36-37页 |
| ·实验材料和方法 | 第37-41页 |
| ·抗体、蛋白质、质粒和细胞株等材料 | 第37页 |
| ·细胞培养和周期同步化 | 第37-38页 |
| ·FEN1体外的磷酸化和放射性~(32)P的标记 | 第38页 |
| ·体外SUMO化的反应 | 第38-39页 |
| ·体外的泛素化反应 | 第39页 |
| ·FEN1在G2/M期细胞裂解物中的降解实验 | 第39-40页 |
| ·免疫耗竭(Immuno-depletion)实验 | 第40页 |
| ·质谱与数据分析 | 第40页 |
| ·染色体计数 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-54页 |
| ·在G2/M期通过泛素-蛋白酶体途径降解FEN1 | 第41-43页 |
| ·SUMO3修饰能介导FEN1的降解 | 第43-45页 |
| ·FEN1的SUMO3修饰依赖于FEN1的磷酸化 | 第45-47页 |
| ·UBE1/UBE2M/PRP19复合体使FEN1泛素化 | 第47-50页 |
| ·SUMO3修饰刺激FEN1的泛素化 | 第50-52页 |
| ·程序性PTM调节S-G2/M后期阶段FEN1的降解 | 第52页 |
| ·FEN1降解的缺陷将导致细胞周期的延迟及基因组不稳定 | 第52-54页 |
| ·本章小结 | 第54-59页 |
| 第3章 FEN1-E160D突变小鼠在苯并芘诱导下的肺癌高风险性的研究 | 第59-75页 |
| 引言 | 第59-60页 |
| ·实验材料和方法 | 第60-66页 |
| ·材料和设备 | 第60页 |
| ·小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞的富集 | 第60-61页 |
| ·MEF细胞的消化和传代 | 第61页 |
| ·MEF细胞的冻存 | 第61-62页 |
| ·MEF细胞的解冻和复苏 | 第62页 |
| ·细胞处理 | 第62-63页 |
| ·细胞计数 | 第63页 |
| ·免疫荧光显微检测 | 第63页 |
| ·免疫印迹(Western-blotting) | 第63-64页 |
| ·染色体涂片 | 第64页 |
| ·制备BPDE损伤的DNA及体外B[α]P损伤DNA的修复实验 | 第64-65页 |
| ·制备检测GEN活性的泡状底物 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-72页 |
| ·E160D细胞对BPDE损伤的DNA修复能力有所削弱 | 第66-67页 |
| ·E160D突变造成FEN1对DNA泡状底物剪切能力降低 | 第67-69页 |
| ·B[α]P处理的E160D突变体中出现较高频率的DSBs | 第69-70页 |
| ·E160D细胞在B[α]P诱导下出现更多的染色体畸变 | 第70-71页 |
| ·E160D比WT小鼠在B[α]P诱导下有更大的肺部肿瘤发病率 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-75页 |
| 第4章 FEN1点突变体表达载体的构建 | 第75-81页 |
| 引言 | 第75-76页 |
| ·实验材料与方法 | 第76-78页 |
| ·构建材料 | 第76页 |
| ·点突变引物设计 | 第76-77页 |
| ·点突变PCR及产物转化 | 第77页 |
| ·点突变的鉴定 | 第77-78页 |
| ·实验结果 | 第78页 |
| ·点突变引物设计 | 第78页 |
| ·点突变鉴定 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 总结与展望 | 第81-87页 |
| FEN1突变体研究结论 | 第81-83页 |
| B[α]P与肺癌的相关研究 | 第83-84页 |
| 展望 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-103页 |
| 主要缩略词 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 附录 | 第105-110页 |
| 个人简历 | 第110-111页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第111页 |
