| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-30页 |
| 1 果胶甲基酯酶(pectin methylesterase,PME)在植物细胞发育以及植物抗逆境中的作用 | 第9-14页 |
| ·果胶及果胶甲基酯酶(PMEs) | 第9-12页 |
| ·果胶甲基酯酶调节植物果实的成熟 | 第12页 |
| ·果胶甲基酯酶在植物花粉管发育中的作用 | 第12-13页 |
| ·果胶甲基酯酶的表达与边缘细胞产生以及抗逆境胁迫的作用 | 第13页 |
| ·展望 | 第13-14页 |
| 2 植物酸铝胁迫与耐胁迫生理机制的研究进展 | 第14-24页 |
| ·土壤中铝的形态及铝毒作用形式 | 第14-15页 |
| ·铝毒对植物的损害位点 | 第15页 |
| ·植物根细胞壁中铝的积累和分布 | 第15-16页 |
| ·植物耐铝的遗传分析 | 第16-17页 |
| ·耐铝的质量遗传位点 | 第16-17页 |
| ·耐铝的数量遗传位点 | 第17页 |
| ·铝毒机理及植物耐铝胁迫机制 | 第17-24页 |
| ·植物铝毒的机理 | 第17-21页 |
| ·铝毒对果胶甲基酯酶活性的影响 | 第18页 |
| ·铝毒对植物营养物质吸收的影响 | 第18-19页 |
| ·铝毒影响植物细胞的分裂和伸长 | 第19-20页 |
| ·铝毒引起的细胞死亡 | 第20-21页 |
| ·铝毒影响细胞内外的信号传导 | 第21页 |
| ·植物耐铝机制 | 第21-24页 |
| ·外部排斥机制 | 第21-23页 |
| ·内部耐受机制 | 第23-24页 |
| ·植物根系阳离子交换量与耐铝性的关系 | 第24页 |
| 3 植物根尖边缘细胞发育及其生物学功能的研究 | 第24-29页 |
| ·边缘细胞的产生 | 第25-26页 |
| ·边缘细胞的生物学特征 | 第26-27页 |
| ·不同物种边缘细胞的数量、大小、活性及其遗传潜力 | 第26页 |
| ·边缘细胞的粘液层及其成分 | 第26-27页 |
| ·边缘细胞的生物学功能 | 第27-28页 |
| ·边缘细胞的研究和应用潜力 | 第28-29页 |
| 4 本研究的提出 | 第29-30页 |
| 第二章 水稻果胶甲基酯酶基因的克隆及表达研究 | 第30-80页 |
| 第一节 水稻果胶甲基酯酶基因的克隆及其水稻和拟南芥的转化 | 第30-55页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-44页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·供试植物 | 第30-31页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·载体质粒 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-44页 |
| ·水稻Pectin Methylesterase(Pme)基因的克隆 | 第31-36页 |
| ·水稻根尖总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·cDNA的合成 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第33页 |
| ·目的片段的T-A克隆 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2法) | 第34-35页 |
| ·转化和筛选 | 第35页 |
| ·质粒DNA提取 | 第35-36页 |
| ·质粒的鉴定 | 第36页 |
| ·农杆菌介导获得转OS-pme基因水稻植株 | 第36-43页 |
| ·表达载体构建 | 第36-39页 |
| ·农杆菌的培养及转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌介导法转化水稻 | 第40-42页 |
| ·抗性愈伤的GUS染色和抗性小苗总DNA的PCR分析 | 第42-43页 |
| ·农杆菌介导真空浸润法获得转OS-pme基因拟南芥 | 第43-44页 |
| ·拟南芥生长的条件 | 第43页 |
| ·真空浸润法转化拟南芥 | 第43页 |
| ·转基因拟南芥的抗性筛选和鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-53页 |
| ·pme基因的RT-PCR扩增 | 第44页 |
| ·克隆载体的构建 | 第44-45页 |
| ·测序分析 | 第45-48页 |
| ·植物转化载体构建 | 第48-50页 |
| ·农杆菌介导法转化水稻 | 第50-51页 |
| ·转基因水稻抗性愈伤GUS活性检测 | 第51页 |
| ·转基因拟南芥GUS活性检测 | 第51-52页 |
| ·转基因拟南芥PCR验证 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第二节 水稻果胶甲基酯酶基因在大肠杆菌E.coli BL21中的表达 | 第55-67页 |
| 1 前言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-62页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·菌种 | 第55页 |
| ·载体质粒 | 第55-56页 |
| ·酶类及其他试剂 | 第56页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-62页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第57页 |
| ·PCR产物电泳及回收 | 第57页 |
| ·克隆载体构建 | 第57-58页 |
| ·IT-A连接 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2法) | 第58页 |
| ·转化和筛选 | 第58页 |
| ·克隆载体DNA的少量提取 | 第58页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第58页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| ·表达质粒的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·表达质粒转化E.coli BL21(DE3)受体菌 | 第59页 |
| ·IPTG的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第60-61页 |
| ·Western-blot杂交检测 | 第61-62页 |
| ·蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜 | 第61页 |
| ·杂交与检测 | 第61-62页 |
| 3.结果与分析 | 第62-65页 |
| ·OS-pme基因的PCR扩增结果 | 第62页 |
| ·克隆载体的构建 | 第62-63页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第64页 |
| ·Western-blot杂交检测 | 第64-65页 |
| 4.讨论 | 第65-67页 |
| 第三节 水稻果胶甲基酯酶基因在毕赤酵母P.pastoris中分泌表达 | 第67-80页 |
| 1 前言 | 第67页 |
| 2 材料与方法 | 第67-74页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·菌种 | 第67-68页 |
| ·载体质粒 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-74页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第69页 |
| ·PCR产物电泳及回收 | 第69页 |
| ·T-A连接 | 第69页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第69-70页 |
| ·转化和筛选 | 第70页 |
| ·质粒DNA的少量提取 | 第70页 |
| ·质粒的鉴定 | 第70页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第70-73页 |
| ·重组表达质粒的线性化 | 第70-71页 |
| ·P.pastoris GS115电转感受态的制备 | 第71页 |
| ·电击转化 | 第71-72页 |
| ·酵母菌落PCR阳性克隆鉴定 | 第72页 |
| ·高G418抗性克隆的筛选 | 第72-73页 |
| ·菌种保存 | 第73页 |
| ·重组酵母的诱导表达和分析 | 第73-74页 |
| ·诱导表达 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE检测酵母表达蛋白 | 第73-74页 |
| 3.结果与分析 | 第74-78页 |
| ·OS-pme基因的PCR扩增 | 第74页 |
| ·克隆载体的构建 | 第74-75页 |
| ·表达载体pPIC9K-OS-pme构建 | 第75页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第75-76页 |
| ·阳性转化子的筛选和PCR鉴定 | 第76-77页 |
| ·多拷贝阳性转化子的筛选 | 第77页 |
| ·高拷贝数酵母菌株甲醇诱导的表达分析 | 第77-78页 |
| 4.讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
