| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-41页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| ·国内外研究进展 | 第18-39页 |
| ·植物病害生物防治发展动态 | 第18-21页 |
| ·生物防治菌球毛壳菌研究现状 | 第21-25页 |
| ·本研究相关的部分功能基因研究进展 | 第25-33页 |
| ·全长功能基因克隆方法简介 | 第33-35页 |
| ·功能基因原核表达及酵母表达研究进展 | 第35-39页 |
| ·目前生物防治菌球毛壳菌应用中存在的问题 | 第39-40页 |
| ·课题来源及主要研究内容 | 第40-41页 |
| ·课题来源 | 第40页 |
| ·主要研究内容 | 第40-41页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第41-66页 |
| ·球毛壳菌功能基因克隆及序列分析 | 第41-53页 |
| ·菌丝总RNA、DNA提取及单链RACE模板合成 | 第41-45页 |
| ·生物防治几丁质酶（chi46）基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·生物防治相关C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）克隆 | 第46页 |
| ·RACE技术克隆小热激蛋白（hsp22.4）等基因cDNA序列 | 第46-48页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gapdh）等基因克隆及序列分析 | 第48-51页 |
| ·生物信息学技术对基因序列综合分析 | 第51-53页 |
| ·球毛壳菌功能基因原核表达及酵母表达 | 第53-66页 |
| ·原核表达载体与菌株及主要试剂 | 第53-54页 |
| ·几丁质酶基因（chi46）原核表达材料与方法 | 第54页 |
| ·小热激蛋白基因（hsp22.4）原核表达材料与方法 | 第54-55页 |
| ·过氧化物膜蛋白基因（pero）原核表达材料与方法 | 第55页 |
| ·酵母表达载体与菌株 | 第55页 |
| ·酵母表达主要试剂及培养基 | 第55-57页 |
| ·表达载体pYE52-chi46、pYE52-hsp、pYE52-gapdh构建 | 第57-58页 |
| ·重组表达载体酵母转化 | 第58-59页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第59-63页 |
| ·转chi46 基因酵母几丁质酶特性分析方法 | 第63-64页 |
| ·转hsp22.4、gapdh基因酵母逆境胁迫实验方法 | 第64-66页 |
| 第3章 球毛壳菌功能基因克隆及序列分析 | 第66-110页 |
| ·菌丝体总RNA、DNA提取及RACE模板合成 | 第66-68页 |
| ·球毛壳菌菌丝体高质量RNA提取 | 第66页 |
| ·反转录合成单链3′RACE及5′RACE cDNA模板 | 第66-67页 |
| ·球毛壳菌菌丝体高质量DNA提取 | 第67-68页 |
| ·生物防治内切几丁质酶基因（chi46）的克隆 | 第68-72页 |
| ·几丁质酶基因chi46 的获得及序列分析 | 第68-70页 |
| ·几丁质酶基因chi46 保守区分析 | 第70页 |
| ·几丁质酶基因chi46 信号肽与糖基化位点分析 | 第70-71页 |
| ·几丁质酶基因chi46 多序列比对及三级结构预测 | 第71-72页 |
| ·生物防治相关C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）克隆 | 第72-77页 |
| ·C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）鉴定 | 第72-73页 |
| ·C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）获得 | 第73页 |
| ·C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）保守区分析 | 第73页 |
| ·C4-甲基甾醇氧化酶基因（sterol）多序列比对 | 第73-77页 |
| ·RACE技术克隆hsp22.4、pero、dlh基因 | 第77-86页 |
| ·小热激蛋白基因（hsp22.4）克隆及序列分析 | 第77-80页 |
| ·过氧化物膜蛋白基因（pero）克隆及序列分析 | 第80-82页 |
| ·二烯醇内酯水解酶基因（dlh）克隆及序列分析 | 第82-86页 |
| ·生物信息学方法克隆gapdh、组蛋白H3、Rp-L10a基因 | 第86-100页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（gapdh）克隆及序列分析 | 第86-91页 |
| ·组蛋白H3 基因的获得及序列分析 | 第91-94页 |
| ·605核糖体蛋白L10a基因（Rp-L10a） | 第94-98页 |
| ·从球毛壳菌ESTs序列中筛选9 条功能基因 | 第98-100页 |
| ·功能基因序列综合分析结果 | 第100-104页 |
| ·内含子剪接位点分析结果 | 第100-102页 |
| ·mRNA加尾信号分析结果 | 第102-103页 |
| ·DNA碱基含量分析结果 | 第103-104页 |
| ·关于球毛壳菌功能基因克隆及序列分析的讨论 | 第104-109页 |
| ·毛壳菌孢子萌发慢的原因及改进措施 | 第104-105页 |
| ·球毛壳菌总RNA提取方法优化 | 第105页 |
| ·球毛壳菌基因组DNA提取方法改良 | 第105页 |
| ·RACE模板合成应该注意的问题 | 第105-106页 |
| ·RACE-PCR方法克隆基因要点 | 第106页 |
| ·几丁质酶基因（chi46）克隆中遇到的问题及解决措施 | 第106-108页 |
| ·克隆的功能基因生物信息学分析 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 第4章 球毛壳菌功能基因原核及酵母表达研究 | 第110-132页 |
| ·生物防治几丁质酶基因（chi46）原核表达研究 | 第110-112页 |
| ·原核表达载体pGEX-chi46 的构建 | 第110-111页 |
| ·原核表达质粒pGEX-chi46 在大肠杆菌中的表达 | 第111-112页 |
| ·小热激蛋白基因（hsp22.4）原核表达研究 | 第112-113页 |
| ·原核表达载体pGEX-hsp的构建 | 第112页 |
| ·原核表达质粒pGEX-hsp在大肠杆菌中的表达 | 第112-113页 |
| ·过氧化物膜蛋白基因（pero）原核表达研究 | 第113-115页 |
| ·原核表达载体pET28a-pero的构建 | 第113-114页 |
| ·原核表达质粒pET28a-pero在大肠杆菌中的表达 | 第114-115页 |
| ·酿酒酵母生长曲线 | 第115页 |
| ·生物防治几丁质酶基因（chi46）酵母表达 | 第115-120页 |
| ·重组pYE52-chi46 酵母表达载体构建 | 第115-117页 |
| ·几丁质酶chi46 基因酵母表达转录水平检测 | 第117-118页 |
| ·转chi46 基因酵母几丁质酶特性分析 | 第118-120页 |
| ·小热激蛋白基因（hsp22.4）酵母表达研究 | 第120-123页 |
| ·重组pYE52-hsp酵母表达载体双酶切检测 | 第120-121页 |
| ·hsp22.4 基因酵母表达转录水平检测 | 第121-122页 |
| ·转hsp22.4 基因酵母抗逆实验 | 第122-123页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（gapdh）酵母表达 | 第123-127页 |
| ·重组pYE52-gapdh酵母表达载体构建 | 第123-125页 |
| ·gapdh酵母表达转录水平检测 | 第125-126页 |
| ·转gapdh基因酵母Na2C03和高温胁迫实验 | 第126-127页 |
| ·关于球毛壳菌功能基因原核表达及酵母表达的讨论 | 第127-130页 |
| ·原核表达诱导过程中出现的问题及解决办法 | 第127页 |
| ·几丁质酶chi46 基因原核表达特性 | 第127页 |
| ·在大肠杆菌中表达重组蛋白存在的问题 | 第127-128页 |
| ·酵母表达引物设计中应该注意的问题 | 第128页 |
| ·酵母转化子菌落PCR检测方法优化 | 第128页 |
| ·酵母总RNA提取方法改进 | 第128-129页 |
| ·环境条件对chi46 基因转化子酶活的影响 | 第129页 |
| ·转基因酵母逆境胁迫实验中碳源的选择原则 | 第129-130页 |
| ·转hsp22.4 及gapdh基因酵母抗逆性比较 | 第130页 |
| ·本章小结 | 第130-132页 |
| 结论 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 附录 | 第145-152页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第152-153页 |
| 哈尔滨工业大学博士学位论文原创性声明 | 第153页 |
| 哈尔滨工业大学博士学位论文使用授权书 | 第153页 |
| 哈尔滨工业大学博士学位涉密论文管理 | 第153-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 个人简历 | 第155页 |
