| 摘要 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第4-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| ·成纤维细胞生长因子简介 | 第11页 |
| ·成纤维细胞生长因子受体的概述 | 第11-17页 |
| ·FGFRs的结构 | 第12-13页 |
| ·FGF和FGFR的相互作用 | 第13-14页 |
| ·FGFR2胞外段的突变 | 第14-17页 |
| ·FGF/FGFR与肿瘤的关系 | 第17-19页 |
| ·FGFs与肿瘤的关系 | 第17-18页 |
| ·FGFR与肿瘤的关系 | 第18-19页 |
| ·FGFR胞外段可成为治疗肿瘤的药物 | 第19-20页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的设计思路 | 第20页 |
| ·本研究的的目的与主要内容 | 第20-23页 |
| ·研究意义 | 第20-21页 |
| ·主要研究路线和内容 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第24-28页 |
| ·细胞株及实验动物 | 第24页 |
| ·菌株及质粒 | 第24页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第24页 |
| ·常用试剂 | 第24-26页 |
| ·试剂配方 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-43页 |
| ·FGFR2内源表达及突变的检测 | 第28-32页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的克隆 | 第32-35页 |
| ·截短型FGFR2Ⅲc基因的表达与鉴定 | 第35-36页 |
| ·菌体破碎和包涵体清洗 | 第36页 |
| ·包涵体变性及凝胶层析复性 | 第36-37页 |
| ·复性后蛋白通过结合肝素亲和层析纯化 | 第37页 |
| ·复性后FGFR2Ⅲc胞外段的鉴定 | 第37-38页 |
| ·体外实验研究FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞的抑制作用 | 第38-40页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对Balb/c(nu/nu)裸鼠人源性乳腺癌MCF-7细胞移植瘤生长的抑制作用 | 第40-41页 |
| ·利用Balb/c小鼠乳腺癌细胞4T1的肺转移模型研究FGFR2Ⅲc胞外段对肿瘤转移的抑制作用 | 第41-42页 |
| ·鸡胚尿囊膜血管模型研究FGFR2Ⅲc胞外段对血管形成的抑制作用 | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果 | 第43-67页 |
| ·肿瘤细胞中FGFR2内源表达及突变的检测 | 第43-45页 |
| ·mRNA水平的检测 | 第43-44页 |
| ·蛋白表达水平的检测 | 第44页 |
| ·肿瘤细胞中表达的FGFR2是否突变的检测 | 第44-45页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的制备 | 第45-49页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的克隆 | 第45-46页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段的表达 | 第46-47页 |
| ·包涵体的凝胶层析复性 | 第47页 |
| ·复性后蛋白通过结合肝素亲和层析纯化 | 第47-49页 |
| ·复性后FGFR2Ⅲc胞外段的鉴定 | 第49-53页 |
| ·免疫印迹鉴定复性后的蛋白 | 第49页 |
| ·串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-TOF-MS)测定复性后蛋白的分子量 | 第49-51页 |
| ·等离子共振检测FGFR2Ⅲc与bFGF的结合力 | 第51-52页 |
| ·MTT法检测FGFR2Ⅲc胞外段对FGF-2促NIH3T3细胞增殖活力的抑制作用 | 第52-53页 |
| ·体外实验研究FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞增殖的抑制作用 | 第53-58页 |
| ·MTT法检测FGFR2Ⅲc胞外段对DU145细胞增殖的抑制作用 | 第53-55页 |
| ·流式细胞仪检测FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞周期的影响 | 第55-57页 |
| ·Western blotting检测前列腺癌DU145细胞膜上FGFRs磷酸化水平的变化 | 第57-58页 |
| ·在体水平研究FGFR2Ⅲc胞外段对Balb/c(nu/nu)裸鼠乳腺癌MCF-7细胞移植瘤生长的抑制作用 | 第58-60页 |
| ·免疫组化分析CD31,CD34在裸鼠肿瘤组织石蜡切片中的表达 | 第60-63页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对Balb/c小鼠乳腺癌4T1细胞肺转移的抑制作用 | 第63-66页 |
| ·鸡胚尿囊膜血管模型研究FGFR2Ⅲc胞外段对血管形成的作用 | 第66-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-74页 |
| ·检测FGFR2Ⅲc及FGFR2Ⅲb在肿瘤细胞中的表达及突变的重要性 | 第67页 |
| ·包涵体的复性策略 | 第67-68页 |
| ·复性后蛋白的鉴定 | 第68-69页 |
| ·细胞学水平研究FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞的抑制作用 | 第69-71页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞增殖的抑制作用 | 第69-71页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对前列腺癌DU145细胞膜上FGFRs磷酸化水平的抑制作用 | 第71页 |
| ·在体水平研究FGFR2Ⅲc胞外段对肿瘤生长,转移及血管形成的抑制作用 | 第71-74页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对血管形成的抑制作用 | 第71-72页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对Balb/e(nu/nu)裸鼠乳腺癌MCF-7细胞移植瘤生长的抑制作用 | 第72-73页 |
| ·FGFR2Ⅲc胞外段对Balb/c小鼠乳腺癌4T1细胞的肺转移的抑制作用 | 第73-74页 |
| 第五章 实验结论及展望 | 第74-76页 |
| ·实验结论 | 第74页 |
| ·展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录 | 第83-92页 |
| 1.野生型FGFR2Ⅲc胞外段克隆测序结果 | 第83-84页 |
| 2.S252W突变型FGFR2Ⅲc胞外段克隆测序结果 | 第84-85页 |
| 3.前列腺癌DU145细胞FGFR2Ⅲc测序结果 | 第85页 |
| 4.前列腺癌DU145细胞FGFR2Ⅲb测序结果 | 第85-86页 |
| 5.前列腺癌PC3细胞FGFR2Ⅲc测序结果 | 第86页 |
| 6.前列腺癌PC3细胞FGFR2Ⅲb测序结果 | 第86-87页 |
| 7.前列腺癌LNCaP细胞FGFR2Ⅲc测序结果 | 第87页 |
| 8.前列腺癌LNCaP细胞FGFR2Ⅲb测序结果 | 第87-88页 |
| 9.乳腺癌MCF-7细胞FGFR2Ⅲc测序结果 | 第88页 |
| 10.乳腺癌MCF-7细胞FGFR2Ⅲb测序结果 | 第88-89页 |
| 11.乳腺癌MDA-MB-231细胞FGFR2Ⅲc测序结果 | 第89页 |
| 12.乳腺癌MDA-MB-231细胞FGFR2Ⅲb测序结果 | 第89-90页 |
| 13.复性后的野生型-FGFR2Ⅲc胞外段的飞行时间质谱结果 | 第90-91页 |
| 14.复性后S252W-FGFR2Ⅲc胞外段的飞行时间质谱结果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
