| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 鸭病毒性肝炎发病机制的研究进展 | 第12-15页 |
| ·DVH发病机制的研究现状 | 第12-14页 |
| ·DVH引起的生化效应 | 第12-13页 |
| ·病理发生及组织学变化 | 第13-14页 |
| ·鸭肝炎病毒粒子的致病力 | 第14-15页 |
| ·鸭肝炎病毒与细胞凋亡 | 第15页 |
| 2 动物机体的抗病毒机制 | 第15-21页 |
| ·特异性免疫应答 | 第15-16页 |
| ·非特异性细胞免疫 | 第16-17页 |
| ·干扰素(IFN) | 第17-21页 |
| ·干扰素及其分类 | 第17-18页 |
| ·干扰素抗病毒的分子机制 | 第18-19页 |
| ·IFN刺激基因(ISG)的诱导和调控 | 第19页 |
| ·IFN诱导ISG的途径 | 第19-20页 |
| ·IFN诱导的抗病毒蛋白 | 第20-21页 |
| ·病毒的免疫逃避 | 第21页 |
| 3 差异表达基因的筛选方法及其应用 | 第21-25页 |
| ·差异表达基因的筛选方法 | 第22-24页 |
| ·消减杂交法(SH) | 第22页 |
| ·mRNA差异显示(DD) | 第22页 |
| ·代表性序列差异分析(RDA) | 第22-23页 |
| ·cDNA-AFLP | 第23页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第23-24页 |
| ·抑制性消减杂交(SSH) | 第24页 |
| ·cDNA微阵列 | 第24页 |
| ·抑制性消减杂交技术在筛选疾病相关基因中的应用 | 第24-25页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 雏鸭感染DHV差异表达基因的筛选及鉴定 | 第26-55页 |
| 1 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·试验动物 | 第27页 |
| ·病毒 | 第27页 |
| ·动物模型的构建 | 第27页 |
| ·试验组织样本的采集 | 第27页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·mRNA的分离 | 第28-29页 |
| ·抑制消减cDNA文库的构建 | 第29-35页 |
| ·Driver和Tester cDNA的制备 | 第29-31页 |
| ·消减杂交 | 第31-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·Tester cDNA的接头连接效率和消减文库的消减效率检测 | 第33-34页 |
| ·消减cDNA质粒文库的构建 | 第34-35页 |
| ·消减cDNA克隆的PCR筛选 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆cDNA片段测序及序列分析 | 第36页 |
| ·RT-PCR检验差异表达基因 | 第36-38页 |
| ·差异表达基因引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·鸭胚肝组织总RNA的提取 | 第36页 |
| ·RT-PCR反应 | 第36-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第38页 |
| ·mRNA的分离 | 第38-39页 |
| ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备 | 第39-40页 |
| ·鸭对DHV感染差异表达基因消减cDNA文库的构建 | 第40-42页 |
| ·消减cDNA文库的消减效率检测 | 第42页 |
| ·消减cDNA克隆的PCR筛选 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆cDNA片段测序及序列分析 | 第43-46页 |
| ·7个差异表达基因的RT-PCR检验 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-54页 |
| ·雏鸭感染DHV应答基因的筛选鉴定 | 第48-53页 |
| ·MGP基因 | 第48-49页 |
| ·溶菌酶G基因 | 第49页 |
| ·Ly6E基因 | 第49-50页 |
| ·ISG12基因 | 第50-51页 |
| ·细胞色素c氧化酶Ⅲ | 第51-52页 |
| ·LECT1基因 | 第52页 |
| ·染色体14开放阅读框100 | 第52-53页 |
| ·应用SSH技术筛选雏鸭对DHV感染的应答基因 | 第53页 |
| ·RT-PCR分析宿主应答基因的表达 | 第53-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 鸭ISG12基因的克隆及原核表达 | 第55-74页 |
| 1 材料与方法 | 第55-63页 |
| ·材料 | 第55-58页 |
| ·菌株、宿主菌 | 第55页 |
| ·载体 | 第55页 |
| ·酶、试剂 | 第55-56页 |
| ·主要试剂的配制 | 第56-57页 |
| ·生物学软件与相关的生物学网址 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-63页 |
| ·带酶切位点PCR引物的设计 | 第58页 |
| ·ISG12基因的扩增 | 第58页 |
| ·ISG12基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·ISG12基因的生物学软件分析 | 第59-60页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第60-62页 |
| ·诱导表达 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-71页 |
| ·ISG12基因的扩增 | 第63页 |
| ·ISG12基因的序列分析 | 第63-69页 |
| ·ISG12推导的氨基酸序列分析 | 第63-64页 |
| ·鸭ISG12基因的分子进化树分析 | 第64-66页 |
| ·ISG12氨基酸序列的生物学软件分析 | 第66-69页 |
| ·重组表达质粒pGEX-KG-ISG12的构建 | 第69页 |
| ·鸭ISG12基因的原核表达 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| ·ISG12基因的发现及意义 | 第71-72页 |
| ·ISG12基因序列及氨基酸序列分析 | 第72页 |
| ·ISG12基因的原核表达 | 第72-73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
