| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| ·装甲RNA（ARMORED RNA）技术 | 第13-16页 |
| ·实时荧光PCR 技术 | 第16-23页 |
| ·实时荧光PCR 原理 | 第17-18页 |
| ·实时荧光PCR 检测方法 | 第18-22页 |
| ·实时荧光PCR 在临床检测上的应用 | 第22-23页 |
| ·禽流感病毒的研究 | 第23-28页 |
| ·禽流感病毒的形态结构与命名 | 第23-24页 |
| ·禽流感病毒分子致病机理 | 第24-25页 |
| ·禽流感的流行与灾害 | 第25-26页 |
| ·禽流感的诊断技术 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-45页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·常用溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·引物和荧光探针的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-45页 |
| ·中间载体pET32a-CP 的构建 | 第31-35页 |
| ·表达载体pET32a-CP-IRES(简称pCPES)的构建 | 第35-38页 |
| ·病毒样颗粒（VLPs）的原核表达和双酶消化实验 | 第38-39页 |
| ·病毒样颗粒的的初步纯化和RT-PCR 检测 | 第39-41页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs)的纯化及其形态观察和稳定性检测 | 第41-42页 |
| ·荧光双链探针的熔解曲线 | 第42页 |
| ·荧光双链探针的特异性实验 | 第42-43页 |
| ·一步法反转录－实时荧光PCR 检测病毒样颗粒RNA 体系的优化 | 第43页 |
| ·双色荧光PCR 检测病毒样颗粒RNA 和禽流感病毒 | 第43-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-60页 |
| ·中间载体PET32A-CP 的构建 | 第45-46页 |
| ·表达载体PET32A-CP-IRES(简称PCPES)的构建 | 第46-47页 |
| ·病毒样颗粒的鉴定 | 第47-50页 |
| ·表达产物的双酶消化鉴定 | 第47页 |
| ·病毒样颗粒的RT-PCR 结果 | 第47-48页 |
| ·病毒样颗粒的电镜观察结果 | 第48-50页 |
| ·病毒样颗粒的稳定性检测 | 第50页 |
| ·不同比例荧光双链探针的熔解曲线 | 第50-51页 |
| ·荧光双链探针的特异性实验 | 第51-53页 |
| ·与靶序列的变温杂交反应 | 第51-52页 |
| ·实时荧光PCR 检测pCPES 和病毒样颗粒RNA 反转录产物的实验 | 第52-53页 |
| ·一步法反转录-实时荧光PCR 检测病毒样颗粒RNA 体系的优化 | 第53-58页 |
| ·双色荧光PCR 检测病毒样颗粒RNA 和禽流感病毒实验 | 第58-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-66页 |
| ·病毒样颗粒作为RNA 病毒检测内标的研究 | 第60-62页 |
| ·检测病毒样颗粒RNA 的实时荧光PCR 体系 | 第62-64页 |
| ·双色荧光PCR 检测内标和禽流感病毒体系 | 第64页 |
| ·本研究的意义 | 第64-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
