| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-8页 |
| 文献综述 | 第8-33页 |
| 第一章 细胞因子的研究进展 | 第8-24页 |
| 1 细胞因子概述 | 第8-9页 |
| 2 细胞因子的特性及分类 | 第9-10页 |
| 3 细胞因子受体家族及其介导的信号转导 | 第10-12页 |
| ·细胞因子受体超家族 | 第10-11页 |
| ·细胞因子受体介导的信号转导 | 第11-12页 |
| 4 细胞因子信号转导的负调控 | 第12-14页 |
| ·SOCS 蛋白的结构与组成 | 第12-13页 |
| ·SOCS 蛋白在细胞因子信号转导中的作用 | 第13-14页 |
| 5 细胞因子的应用 | 第14-18页 |
| ·细胞因子的免疫佐剂效应 | 第14页 |
| ·细胞因子佐剂效应机理 | 第14-16页 |
| ·强化细胞因子免疫佐剂作用新途径 | 第16-18页 |
| 6 IL-18 的国内外研究现况 | 第18-24页 |
| ·IL-18 的来源和结构特征 | 第18-19页 |
| ·IL-18 的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·IL-18 的应用展望 | 第20-22页 |
| ·IL-18 信号转导途径研究 | 第22-24页 |
| 第二章 毕赤酵母表达外源基因的研究进展 | 第24-33页 |
| 1 P.Pastoris 表达系统的优点 | 第24-25页 |
| 2 Pastoris 的生物学特性 | 第25页 |
| 3 Pastoris 表达载体及其元件 | 第25-27页 |
| ·表达载体 | 第25-26页 |
| ·启动子 | 第26-27页 |
| ·信号肽序列 | 第27页 |
| ·选择标记 | 第27页 |
| 4 P.Pastoris 宿主菌 | 第27-28页 |
| 5 P.Pastoris 的转化及重组整合 | 第28-30页 |
| ·质粒在AOXI 或aoxl::ARG4 位点的插入 | 第28-29页 |
| ·质粒在his4 位点的插入 | 第29-30页 |
| ·质粒在AOXl 位点的置换 | 第30页 |
| 6 影响P.Pastoris 表达外源基因的因素 | 第30-33页 |
| ·外源基因的内在特性 | 第30-31页 |
| ·表达条件 | 第31页 |
| ·载体菌株 | 第31-32页 |
| ·产物稳定性 | 第32-33页 |
| 试验研究 | 第33-52页 |
| 第一章 猪IL-18 在毕赤酵母中的表达及活性分析 | 第33-46页 |
| 1 材料和方法 | 第33-40页 |
| ·菌株与载体 | 第33页 |
| ·主要酶和试剂 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·仪器与设备 | 第34页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·重组载体线性化及感受态酵母的制备 | 第37页 |
| ·电转化及重组酵母的筛选鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第39页 |
| ·表达的pIL-18 的纯化 | 第39页 |
| ·表达的pIL-18 蛋白定量和活性测定 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| ·重组载体pPIC9K-IL-18 的构建及PCR 和双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组酵母菌株GS115/ pPIC9K-IL-18 的鉴定 | 第41页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·生物活性测定 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 第二章 猪IL-18 在毕赤酵母中分泌表达条件的优化 | 第46-52页 |
| 1 材料和方法 | 第46-47页 |
| ·菌株、载体、培养基、仪器设备、表达载体构建、电转酵母 | 第46页 |
| ·不同时间的诱导表达 | 第46页 |
| ·不同诱导型诱导表达 | 第46页 |
| ·不同pH 培养液的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·不同剂量甲醇的诱导表达 | 第47页 |
| ·不同接种量的诱导表达 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-49页 |
| ·重组载体pPIC9K-IL-18 的PCR 和双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·诱导时间对P. Pastoris 表达pIL-18 的影响 | 第48页 |
| ·诱导型对P. Pastoris 表达pIL-18 的影响 | 第48页 |
| ·培养基pH 对P. Pastoris 表达pIL-18 的影响 | 第48页 |
| ·甲醇浓度对P. Pastoris 表达pIL-18 的影响 | 第48-49页 |
| ·接种量对P. Pastoris 表达pIL-18 的影响 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| 研究结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 作者简介 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
