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宫颈癌Hela细胞辐射后加速增殖的相关研究

致谢第1-13页
主要英文缩写第13-14页
摘要第14-17页
Abstract第17-20页
第一章 前言(综述)第20-85页
 1 宫颈癌流行病学与病因学的研究进展第20-31页
   ·流行病学研究现况第20-22页
     ·流行趋势第20页
     ·地理分布特点第20-21页
     ·人群分布特点第21-22页
       ·年龄分布特点第21页
       ·种族分布特点第21-22页
   ·宫颈癌病因学及高危因素研究现况第22-31页
       ·人乳头瘤病毒(HPV)感染第22-23页
       ·HPV的结构与生物学特性:第22页
       ·HPV的致癌的分子生物学机制第22-23页
       ·HPV与宫颈癌的密切程度第23页
       ·HPV研究的问题与展望第23页
     ·生殖道其他微生物感染第23-24页
     ·宫颈病变第24页
     ·激素水平第24页
     ·机体免疫功能第24-25页
     ·性因素第25页
     ·社会因素第25页
     ·基因遗传学和分子遗传学第25-31页
       ·与宫颈癌相关的癌基因第25-27页
       ·与宫颈癌相关的抑癌基因第27-29页
       ·染色体的改变第29-31页
     ·宫颈癌病因学研究的前景与展望第31页
 2 宫颈癌筛查诊断的研究现况第31-41页
   ·筛查诊断技术的研究现况第31-38页
     ·细胞学诊断技术第31-33页
       ·巴氏涂片第31-32页
       ·液基细胞学第32-33页
       ·细胞学自动阅片系统第33页
     ·临床检查手段第33-35页
       ·肉眼观察第33-34页
       ·阴道镜检查第34页
       ·宫颈照相第34页
       ·荧光镜检法第34-35页
     ·病毒学检测技术第35-37页
       ·检测方法第35-36页
       ·病毒学检测技术的作用第36-37页
     ·宫颈癌筛查诊断方法优缺点比较第37-38页
   ·适合筛查人群规定第38-39页
     ·筛查最佳起始和终止年龄第38页
     ·筛查时间间隔第38-39页
   ·筛查组合方案的制定第39-41页
   ·筛查诊断工作的展望第41页
 3 宫颈癌的放射治疗第41-70页
   ·宫颈癌放射治疗概况第41-42页
   ·宫颈癌传统放射治疗技术的选择及临床意义第42-48页
     ·宫颈癌的腔内放疗技术的发展及临床运用价值第42-46页
       ·宫颈癌腔内放疗发展史第42-43页
       ·宫颈癌腔内放疗技术的临床应用第43-45页
       ·存在的问题及提出的建议第45-46页
     ·宫颈癌的体外放疗技术的发展及临床运用价值第46-48页
       ·宫颈癌的体外放疗发展史第46页
       ·宫颈癌体外照射的临床应用第46-47页
       ·存在问题及提出的建议第47-48页
   ·宫颈癌新的放射放射治疗技术的选择及意义第48-60页
     ·以3D影像为基础的宫颈癌近距离治疗第48页
     ·宫颈癌与适形调强放射治疗第48-54页
       ·适形调强放疗的概述第48-49页
       ·宫颈癌与三维适形调强放疗第49-51页
       ·子宫颈癌的生物适形调强放射治疗第51-54页
     ·立体定向治疗第54-57页
       ·立体定向治疗的发展第54-55页
       ·立体定向放疗的临床应用第55-56页
       ·展望第56-57页
     ·子宫颈癌的非常规放射治疗第57-60页
       ·超分割、加速超分割和低分割技术在肿瘤治疗中的应用第57-58页
       ·超分割、后程加速治疗在宫颈癌治疗中的运用第58-60页
   ·宫颈癌放射方式的选择及意义第60-65页
     ·宫颈癌单纯放疗第60-61页
     ·放射治疗与手术治疗联合第61-62页
       ·术前放疗第61页
       ·术后放疗第61-62页
     ·放射治疗与化学治疗结合第62-64页
       ·概述第62页
       ·放疗与常用化疗药物作用的机制第62-63页
       ·放疗与化疗联合应用的方法第63-64页
     ·放射治疗与热疗结合第64页
     ·放射治疗与基因治疗结合。第64-65页
   ·影响宫颈癌放射治疗疗效的主要因素第65-67页
     ·放射源第65页
     ·年龄第65-66页
     ·病理类型与分化程度第66页
     ·临床分期与原发灶大小第66页
     ·肿瘤的生长方式以及病程的早晚第66页
     ·盆、腹腔淋巴结转移程度第66-67页
     ·照射剂量和治疗方式第67页
     ·淋巴结预防性放射第67页
     ·一般健康状况及是否有合并症第67页
     ·肿瘤的周围环境第67页
     ·乏氧现象第67页
   ·放射治疗副反应的预防与处理第67-68页
   ·宫颈癌放射治疗中的护理第68-70页
     ·心理护理和健康教育指导第68页
     ·营养和饮食护理第68页
     ·照射野皮肤的护理第68-69页
     ·阴道冲洗的护理第69页
     ·腔内放射治疗的护理第69页
     ·放射性直肠炎的预防与护理第69-70页
     ·放射性膀胱炎的预防及护理第70页
     ·造血系统不良反应的预防和护理第70页
 4 宫颈癌放射生物学的研究现况第70-85页
   ·放射生物学研究现况第70-79页
     ·放射生物学概述第70-71页
     ·放射生物学参数第71-73页
       ·主要研究对象(射线)第71页
       ·射线的多种计量单位认识第71页
       ·辐射剂量率的研究第71页
       ·辐射最大容许剂量研究第71-72页
       ·辐射生物等效剂量的研究第72-73页
     ·辐射对于DNA和染色体的作用第73-74页
     ·电离辐射的细胞效应第74-76页
       ·放射使细胞损伤产生6个方面的结局第74页
       ·细胞放射生物学的4R第74-76页
     ·辐射生物剂量第76页
     ·癌基因与放射敏感性第76-77页
     ·凋亡与放射敏感性第77页
     ·与放射生物学效应有关的基因研究进展第77-79页
       ·AT基因及其放射效应第77-78页
       ·p53基因及其放射效应第78页
       ·p16基因及其放射效应第78页
       ·其他新发现的与放射效应有关基因第78-79页
   ·宫颈癌放射生物学研究现况第79-85页
     ·概述第79页
     ·宫颈癌细胞的放射敏感性第79-82页
       ·bcl-2基因和bax基因第80页
       ·p53基因抑癌基因第80-81页
       ·myc基因第81页
       ·C-fos基因第81页
       ·其他因子、因素第81-82页
     ·肿瘤细胞乏氧状态第82-84页
       ·肿瘤内源性乏氧标记物第82-84页
       ·肿瘤血管状况检测第84页
     ·细胞增殖情况第84页
     ·展望第84-85页
第二章 宫颈癌Hela细胞放射敏感性的初步检测第85-100页
 1.材料和方法第85-91页
   ·试验材料第85-88页
     ·研究对象第85页
     ·试剂来源及配制第85-88页
     ·主要仪器及器材第88页
   ·实验方法第88-91页
     ·细胞培养第88-89页
       ·人宫颈癌细胞株(HELA)的复苏第88页
       ·HELA细胞的传代第88-89页
     ·细胞抑制率测定——四唑盐(MTT)比色法第89-90页
       ·实验原理第89页
       ·实验步骤第89-90页
     ·HE染色观察细胞形态学变化第90-91页
       ·原理第90页
       ·试验步骤第90-91页
   ·统计方法第91页
 2 结果第91-98页
   ·细胞形态的观测第91-93页
     ·倒置显微镜下观察Hela细胞的形态变化第91-92页
     ·HE染色观察细胞形态学变化第92-93页
   ·宫颈癌Hela细胞24小时内细胞生长抑制变化情况以及后续试验放射敏感时间点的选择第93-95页
   ·宫颈癌Hela细胞连续6天细胞生长抑制变化情况以及后续试验放射敏感剂量点的选择第95-98页
 3 讨论第98-100页
第三章 宫颈癌Hela细胞加速增殖效应的检测及分析第100-120页
 1 材料和方法第100-104页
   ·试验材料第100页
     ·研究对象、试验仪器、细胞培养所用试剂(均同第一章)。第100页
     ·增加的试剂、器材第100页
     ·试剂的配置方法第100页
   ·实验方法第100-104页
     ·细胞计数法检测Hela细胞的潜在倍增时间(Tpot)。第100-102页
       ·实验原理第100-101页
       ·试验步骤第101-102页
     ·照射对HELA细胞克隆形成率的影响第102页
       ·原理第102页
       ·试验步骤第102页
     ·观察细胞周期分布第102-104页
       ·流式细胞仪的工作原理第102-103页
       ·试验步骤第103-104页
       ·计算方法和意义第104页
   ·统计学处理:第104页
 2 结果第104-117页
   ·Tpot的测定与分析第104-106页
     ·统计Tpot数据并绘制相关曲线图第104-105页
     ·各个照射剂量组之间Tpot的差异比较分析第105-106页
     ·分析剂量大小与Tpot大小的量效关系第106页
   ·辐射对宫颈癌Hela细胞克隆形成的影响第106-109页
     ·不同照射剂量下,细胞形成克隆株形成情况的细胞形态学观测。第106-108页
     ·不同辐射剂量下Hela细胞克隆形成率数据统计第108-109页
   ·不同辐射剂量下,Hela细胞的克隆形成率与潜在倍增时间的关系分析。第109-110页
   ·流式细胞术(lfow ctyometer,FCM)检测 观察Hela 细胞周期分布第110-117页
     ·流式细胞分析图结果第110-113页
     ·细胞周期各时相的统计结果以及图像分析第113-115页
     ·增殖指标SPF与PI的统计结果与分析第115-117页
 3 分析第117-120页
   ·Tpot测定的意义第117页
   ·克隆形成试验第117-118页
   ·电离辐射对细胞周期的影响第118-120页
第四章 ~(60)Co-γ射线辐射后宫颈癌HELA细胞株增殖基因表达变化第120-139页
 1.材料和方法第120-132页
   ·试验方法:半定量RT-PCR法测定PCNA、Ki-67的表达第120-130页
     ·试剂来源第120-121页
     ·试剂的配制第121-122页
     ·实验仪器及用具处理第122-123页
       ·仪器第122页
       ·用具处理第122-123页
     ·具体的试验步骤第123-130页
       ·细胞培养第123页
       ·提取Hela细胞总RNA第123-124页
         ·对提取得RNA进行结果判断第123-124页
       ·cDNA合成第124-125页
       ·PCNA、Ki-67 mRNA表达测定第125-128页
       ·引物浓度计算第128页
       ·PCR扩增第128-129页
       ·PCR扩增产物行2%琼脂糖凝胶电泳第129-130页
       ·结果判断第130页
   ·免疫细胞化学法测定PCNA、Ki-67在细胞中的表达变化第130-132页
     ·试验原理第130页
     ·试剂来源于及配制第130-131页
       ·试剂来源第130页
       ·试剂的准备第130-131页
     ·试验步骤第131-132页
       ·细胞培养第131页
       ·染色步骤第131-132页
       ·结果判断第132页
   ·数据处理第132页
 2 结果第132-137页
   ·RT-PCR检测Hela细胞中Ki-67以及PCNA的表达第132-135页
     ·PCNA、Ki-67的电泳图第132-134页
     ·PCNA、Ki-67的表达分析第134-135页
   ·免疫细胞化学方法检测Ki-67、PCNA的表达情况第135-137页
     ·Ki-67、PCNA免疫细胞化学图第135-137页
     ·Ki-67、PCNA蛋白表达统计结果第137页
 3 讨论第137-139页
   ·PCNA第137-138页
   ·Ki-67第138-139页
小结第139-140页
参考文献第140-156页

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