中文摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
一 文献综述 | 第8-23页 |
1 番木瓜环斑病毒(PRSV)的研究现状 | 第8-10页 |
·前言 | 第8页 |
·番木瓜环斑病毒 | 第8-10页 |
·症状 | 第9页 |
·病毒粒子特性 | 第9-10页 |
·传播途径 | 第10页 |
2 马铃薯丫病毒属病毒研究进展 | 第10-15页 |
·马铃薯丫病毒属病毒的生物学特性 | 第10-11页 |
·马铃薯Y 病毒属基因组结构与功能 | 第11-15页 |
·非翻译区(NTR) | 第11-12页 |
·P1 蛋白 | 第12页 |
·HC-Pro 蛋白 | 第12-14页 |
·P3 蛋白 | 第14-15页 |
·其它 | 第15页 |
3 防治研究 | 第15-21页 |
·番木瓜抗病育种和组培研究 | 第15-16页 |
·弱株系的研究和利用 | 第16页 |
·基因工程抗病性 | 第16-21页 |
·外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因介导的抗性 | 第16-18页 |
·复制酶(replicase ,RP)基因介导的抗性 | 第18-20页 |
·运动蛋白(Movement Protein, MP)基因介导的抗性 | 第20-21页 |
·其他基因介导的抗性 | 第21页 |
4 本研究的目的意义和技术路线 | 第21-23页 |
·目的意义 | 第21-22页 |
·技术路线 | 第22-23页 |
二 材料和方法 | 第23-33页 |
1 材料和试剂 | 第23页 |
·材料 | 第23页 |
·试剂 | 第23页 |
·主要仪器 | 第23页 |
·菌株与载体质粒 | 第23页 |
2 方法 | 第23-33页 |
·病毒RNA 的抽提 | 第23-24页 |
·总RNA 提取 | 第23-24页 |
·RNA 纯度及完整性检测 | 第24页 |
·病毒基因组全序列的扩增 | 第24-29页 |
·中间序列的RT-PCR | 第24-26页 |
·末端序列的测定:3'-RACE 和5'-RACE | 第26-28页 |
·PCR 扩增全长 | 第28-29页 |
·PCR 产物纯化 | 第29页 |
·回收的PCR 片段与T-载体连接 | 第29-30页 |
·感受态细胞的制备 | 第30页 |
·重组质粒转化感受态细胞 | 第30-31页 |
·质粒载体的小量制备(碱裂法) | 第31页 |
·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
·序列测定和分析 | 第31-33页 |
三 结果与分析 | 第33-52页 |
1 感病总RNA 的电泳检测 | 第33页 |
2 基因组各段RT-PCR 及末端RACE 扩增检测 | 第33-39页 |
3 一步法RT-PCR 扩增PRSV-HN 分离物全序列 | 第39页 |
4 病毒基因组结构与功能的分析 | 第39-52页 |
·PRSV-HN 分离物基因组全序列和ORF 结构分析 | 第39页 |
·PRSV-HN 分离物ORF 编码的聚合蛋白酶切位点分析 | 第39-40页 |
·PRSV-HN 分离物与12 株PRSV 全基因组序列特征的比较 | 第40-46页 |
·PRSV 基因组酶解位点 | 第40页 |
·PRSV 基因组核苷酸数目 | 第40-44页 |
·核苷酸、氨基酸序列同源性 | 第44页 |
·系统进化树分析 | 第44-46页 |
·PRSV-HN 分离物基因组结构保守基序及其功能分析 | 第46-52页 |
四 讨论 | 第52-55页 |
1 利用RACE-PCR 获得末端序列 | 第52页 |
2 长片段的RT-PCR | 第52-53页 |
3 PRSV-HN 分离物CDNA 克隆的可能利用价值 | 第53-55页 |
·研究病毒运动 | 第53-54页 |
·研究病毒基因功能 | 第54-55页 |
五 主要结论与进一步研究的建议 | 第55-57页 |
1 主要结论 | 第55-56页 |
2 进一步研究的建议 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-67页 |
论文涉及的部分缩略词(Abbreviation) | 第67-69页 |
致谢 | 第69页 |