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番木瓜环斑病毒海南分离物(PRSV-HN)全基因组克隆与序列分析

中文摘要第1-4页
Abstract第4-8页
一 文献综述第8-23页
 1 番木瓜环斑病毒(PRSV)的研究现状第8-10页
   ·前言第8页
   ·番木瓜环斑病毒第8-10页
     ·症状第9页
     ·病毒粒子特性第9-10页
     ·传播途径第10页
 2 马铃薯丫病毒属病毒研究进展第10-15页
   ·马铃薯丫病毒属病毒的生物学特性第10-11页
   ·马铃薯Y 病毒属基因组结构与功能第11-15页
     ·非翻译区(NTR)第11-12页
     ·P1 蛋白第12页
     ·HC-Pro 蛋白第12-14页
     ·P3 蛋白第14-15页
     ·其它第15页
 3 防治研究第15-21页
   ·番木瓜抗病育种和组培研究第15-16页
   ·弱株系的研究和利用第16页
   ·基因工程抗病性第16-21页
     ·外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因介导的抗性第16-18页
     ·复制酶(replicase ,RP)基因介导的抗性第18-20页
     ·运动蛋白(Movement Protein, MP)基因介导的抗性第20-21页
     ·其他基因介导的抗性第21页
 4 本研究的目的意义和技术路线第21-23页
   ·目的意义第21-22页
   ·技术路线第22-23页
二 材料和方法第23-33页
 1 材料和试剂第23页
   ·材料第23页
   ·试剂第23页
   ·主要仪器第23页
   ·菌株与载体质粒第23页
 2 方法第23-33页
   ·病毒RNA 的抽提第23-24页
     ·总RNA 提取第23-24页
     ·RNA 纯度及完整性检测第24页
   ·病毒基因组全序列的扩增第24-29页
     ·中间序列的RT-PCR第24-26页
     ·末端序列的测定:3'-RACE 和5'-RACE第26-28页
     ·PCR 扩增全长第28-29页
   ·PCR 产物纯化第29页
   ·回收的PCR 片段与T-载体连接第29-30页
   ·感受态细胞的制备第30页
   ·重组质粒转化感受态细胞第30-31页
   ·质粒载体的小量制备(碱裂法)第31页
   ·重组质粒的鉴定第31页
   ·序列测定和分析第31-33页
三 结果与分析第33-52页
 1 感病总RNA 的电泳检测第33页
 2 基因组各段RT-PCR 及末端RACE 扩增检测第33-39页
 3 一步法RT-PCR 扩增PRSV-HN 分离物全序列第39页
 4 病毒基因组结构与功能的分析第39-52页
   ·PRSV-HN 分离物基因组全序列和ORF 结构分析第39页
   ·PRSV-HN 分离物ORF 编码的聚合蛋白酶切位点分析第39-40页
   ·PRSV-HN 分离物与12 株PRSV 全基因组序列特征的比较第40-46页
     ·PRSV 基因组酶解位点第40页
     ·PRSV 基因组核苷酸数目第40-44页
     ·核苷酸、氨基酸序列同源性第44页
     ·系统进化树分析第44-46页
   ·PRSV-HN 分离物基因组结构保守基序及其功能分析第46-52页
四 讨论第52-55页
 1 利用RACE-PCR 获得末端序列第52页
 2 长片段的RT-PCR第52-53页
 3 PRSV-HN 分离物CDNA 克隆的可能利用价值第53-55页
   ·研究病毒运动第53-54页
   ·研究病毒基因功能第54-55页
五 主要结论与进一步研究的建议第55-57页
 1 主要结论第55-56页
 2 进一步研究的建议第56-57页
参考文献第57-67页
论文涉及的部分缩略词(Abbreviation)第67-69页
致谢第69页

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