番茄抗根结线虫基因SlMi导入莴苣的研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 2 前人研究进展 | 第12-19页 |
| ·Mi基因的研究进展 | 第12-17页 |
| ·根结线虫的危害 | 第12-13页 |
| ·已克隆的抗线虫基因 | 第13-14页 |
| ·番茄中Mi基因的克隆及其他抗根结线虫基因 | 第14-15页 |
| ·Mi基因的抗病机理 | 第15-16页 |
| ·Mi基因的应用状况及前景 | 第16-17页 |
| ·莴苣遗传转化研究进展 | 第17-19页 |
| ·莴苣植株再生的研究进展 | 第17-18页 |
| ·莴苣遗传转化的研究进展 | 第18-19页 |
| 3 课题的研究目的和内容 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-25页 |
| 1 实验材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-25页 |
| ·莴苣再生体系的建立 | 第20-21页 |
| ·无菌苗的获得和外植体的准备 | 第20页 |
| ·再生体系的建立 | 第20-21页 |
| ·生根 | 第21页 |
| ·SlMi基因的克隆与表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·SlMi基因的克隆 | 第21页 |
| ·SlMi基因表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·莴苣遗传转化体系的建立 | 第22页 |
| ·Kam对子叶不定芽诱导的影响 | 第22页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第22页 |
| ·菌液的准备 | 第22页 |
| ·农杆菌侵染 | 第22页 |
| ·选择培养 | 第22页 |
| ·转化苗的生根与移栽 | 第22页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第22-24页 |
| ·转基因莴苣植株的PCR检测 | 第23页 |
| ·转基因莴苣植株的Southern杂交分析 | 第23页 |
| ·转基因莴苣植株的半定量RT-PCR分析 | 第23-24页 |
| ·转化植株的抗性评价 | 第24页 |
| ·根部组织石蜡切片观察 | 第24-25页 |
| 结果与分析 | 第25-36页 |
| 1 莴苣再生体系 | 第25-26页 |
| ·不同激素配比对子叶诱导不定芽的影响 | 第25-26页 |
| ·生根 | 第26页 |
| 2 SlMi基因的克隆与表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·SlMi基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·SlMi基因表达载体的构建 | 第27页 |
| 3 农杆菌介导的莴苣转化 | 第27-29页 |
| ·外植体的Kam抗性 | 第27-28页 |
| ·转基因植株的获得 | 第28-29页 |
| 4 转基因植株的分子检测 | 第29-30页 |
| ·PCR分析 | 第29页 |
| ·Southern Blot分析 | 第29-30页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第30页 |
| 5 转基因植株的根结线虫抗性评价 | 第30-31页 |
| 6 转基因植株T_1代的遗传分析及抗性鉴定 | 第31-32页 |
| 7 转基因植株T_1代种子发芽率 | 第32-33页 |
| 8 转基因植株T_1代种子的形态学比较 | 第33-34页 |
| 9 根部石蜡切片观察结果 | 第34-35页 |
| 10 转基因T_1代植株苗期Kam筛选的初步探索 | 第35-36页 |
| 讨论 | 第36-39页 |
| 1 莴苣激素配比及基因型对再生的影响 | 第36页 |
| 2 Kam的应用 | 第36-37页 |
| 3 Mi基因的应用前景 | 第37页 |
| 4 外源基因的整合对植株的影响 | 第37-38页 |
| 5 不足与展望 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 附录 | 第46-54页 |
| 附录一: 植物DNA的小量法提取程序 | 第46-47页 |
| 附录二: 质粒的小量提取方法 | 第47-48页 |
| 附录三: Southern Blot分析 | 第48-52页 |
| 附录四: TriZOL一步法提取植物总RNA方法 | 第52-53页 |
| 附录五: 硕士在读期间已接受的文章及会议论文摘要 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
