| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-41页 |
| 第一节 Myostatin 的研究进展 | 第14-33页 |
| 1 Myostatin 的发现 | 第14-15页 |
| 2 Myostatin 基因的多态性及然突变 | 第15-16页 |
| 3 Myostatin 的生物合成和加工 | 第16-22页 |
| 4 Myostatin 的表达分布 | 第22-23页 |
| 5 Myostatin 的生理功能 | 第23-27页 |
| 6 Myostatin 的基因调控 | 第27-28页 |
| 7 Myostatin 的作用机理 | 第28-29页 |
| 8 鱼类Myostatin 的研究进展 | 第29-31页 |
| 9 Myostatin 的基因在育种中的应用前景 | 第31-33页 |
| 第二节 荧光定量PCR 中内参的选择 | 第33-41页 |
| 1 通过样品大小/体积进行校正 | 第33-35页 |
| 2 通过RNA 的定量进行校正 | 第35-37页 |
| 3 通过内参基因进行校正 | 第37-39页 |
| 4 合适内参基因的选择 | 第39-41页 |
| 第二章 牙鲆Myostatin 基因的克隆和表达分析 | 第41-63页 |
| 1 材料和方法 | 第41-52页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·PCR 和RT-PCR 反应引物组合 | 第42-43页 |
| ·总RNA 的提取、纯化及检测 | 第43-44页 |
| ·牙鲆MSTN cDNA 第一链的合成 | 第44-45页 |
| ·牙鲆MSTN 基因同源序列的克隆 | 第45-47页 |
| ·RACE PCR 扩增牙鲆MSTN 全长cDNA 序列 | 第47-48页 |
| ·牙鲆MSTN 基因组序列的获得 | 第48-50页 |
| ·牙鲆MSTN 基因的组织差异表达 | 第50页 |
| ·牙鲆MSTN 基因的胚胎发育表达 | 第50-52页 |
| ·牙鲆MSTN 基因的序列分析 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-60页 |
| ·牙鲆MSTN 全长cDNA 序列的克隆 | 第52页 |
| ·牙鲆MSTN 基因组DNA 序列的克隆 | 第52-54页 |
| ·聚类分析 | 第54-58页 |
| ·牙鲆MSTN 基因的组织表达分析 | 第58页 |
| ·牙鲆MSTN 基因的发育表达分析 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 牙鲆胚胎发育期内参基因的筛选 | 第63-75页 |
| 1 材料和方法 | 第64-67页 |
| ·牙鲆胚胎的制备 | 第64页 |
| ·RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第64-65页 |
| ·候选内参基因的选择和引物设计 | 第65-66页 |
| ·实时定量PCR | 第66页 |
| ·不同引物PCR 效率的确定 | 第66页 |
| ·计算和数据统计分析 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| ·定量RT-PCR 的效率和实验偏差 | 第67-68页 |
| ·胚胎发育样品的定量RT-PCR扩增和熔解曲线分析 | 第68-70页 |
| ·mRNA基因在不同的发育时期的相对丰度 | 第70-71页 |
| ·胚胎发育过程中参考基因的表达模式 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 第四章 牙鲆MSTN 基因SNPS 位点的鉴定以及微卫星位点与生长相关性分析 | 第75-89页 |
| 1 材料和方法 | 第76-81页 |
| ·实验材料 | 第76页 |
| ·本实验中用到的引物 | 第76页 |
| ·总RNA 的提取、纯化及检测 | 第76-78页 |
| ·牙鲆MSTN cDNA 第一链的合成 | 第78页 |
| ·牙鲆MSTN 基因SNPs 位点的鉴定 | 第78-79页 |
| ·牙鲆MSTN基因Intron2和3’-UTR微卫星与个体大小相关性分析 | 第79-80页 |
| ·荧光定量PCR | 第80-81页 |
| 2 结果 | 第81-86页 |
| ·牙鲆MSTN 全长cDNA 序列的克隆 | 第81-84页 |
| ·牙鲆大小群体MSTN 基因微卫星分析 | 第84-85页 |
| ·牙鲆MSTN 基因在灭活鳗弧菌刺激下的表达 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-89页 |
| 第五章 石鲽、大菱鲆和半滑舌鳎MSTN 的克隆及序列分析 | 第89-110页 |
| 1 材料和方法 | 第90-98页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·总RNA 的提取、纯化及检测 | 第91-92页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎cDNA 第一链的合成 | 第92-93页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎MSTN 基因同源序列的克隆 | 第93页 |
| ·RACE PCR 扩增大菱鲆MSTN 全长cDNA 序列 | 第93-94页 |
| ·RACE PCR 扩增半滑舌鳎MSTN 全长cDNA 序列 | 第94-95页 |
| ·RACE PCR 扩增石鲽MSTN 全长cDNA 序列 | 第95-96页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎MSTN 基因组序列的获得 | 第96-97页 |
| ·定量PCR 检测半滑舌鳎MSTN 基因的组织分布表达 | 第97-98页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎MSTN 基因的序列分析 | 第98页 |
| 2 结果 | 第98-107页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎MSTN 全长cDNA 序列的克隆 | 第98-100页 |
| ·石鲽、大菱鲆、半滑舌鳎MSTN 基因组DNA 序列的克隆 | 第100-104页 |
| ·聚类分析 | 第104-106页 |
| ·半滑舌鳎MSTN 基因的组织表达分析 | 第106-107页 |
| 3 讨论 | 第107-110页 |
| 第六章 牙鲆MSTN 基因前肽和成熟肽的原核表达 | 第110-119页 |
| 1 材料和方法 | 第110-114页 |
| ·pGex-4T-3-His 载体的构建 | 第110-111页 |
| ·牙鲆MSTN 基因N-端前肽（propeptide）和C-端成熟肽（mature peptied)基因片段的获得 | 第111页 |
| ·PCR 产物和pGex-4T-3-His 载体的体外重组 | 第111-112页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第112页 |
| ·SDS-PAGE | 第112-113页 |
| ·变性条件下提取和纯化重组蛋白 | 第113页 |
| ·纯化重组蛋白的复性 | 第113-114页 |
| 2 结果 | 第114-117页 |
| ·pGex-4T-3-His 载体的构建 | 第114页 |
| ·目的片段的体外重组 | 第114-115页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第115-116页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第116-117页 |
| ·重组蛋白的透析复性 | 第117页 |
| 3. 讨论 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
