| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 鸡球虫病免疫防治与相关疫苗的研究进展 | 第9-23页 |
| ·概述 | 第9-10页 |
| ·鸡球虫的免疫防治研究进展 | 第10-18页 |
| ·球虫侵入性抗原的研究 | 第10-15页 |
| ·宿主免疫应答 | 第15-18页 |
| ·鸡球虫病疫苗研究进展 | 第18-23页 |
| ·鸡球虫活卵囊疫苗 | 第18-20页 |
| ·基因工程疫苗 | 第20-21页 |
| ·展望 | 第21-23页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG5、SAG10 的基因序列分析及SAG10 全长的扩增 | 第23-40页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·试验动物和饲料 | 第23页 |
| ·实验所用虫株 | 第23-24页 |
| ·菌株、载体 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂和试剂盒 | 第24页 |
| ·培养基及配制 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·CaCl_2 法转化用材料 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需材料 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·裂殖子的纯化 | 第25-26页 |
| ·裂殖子总RNA 的提取 | 第26页 |
| ·SAG5、SAG10 基因的RT-PCR | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 产物的回收纯化 | 第27页 |
| ·RT-PCR 产物与pGEM-T-easy 的连接 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α(CaCl_2 法) | 第28页 |
| ·转化克隆的PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·PCR 阳性克隆的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的序列测定及分析 | 第30页 |
| ·SAG10 的RACE 扩增 | 第30-32页 |
| ·结果 | 第32-38页 |
| ·SAG5、SAG10 的RT-PCR 结果 | 第32页 |
| ·转化菌落的PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pGEM-T-Easy-SAG5/SAG10 的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·SAG5、SAG10 基因的序列分析 | 第33-37页 |
| ·RACE 结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·表面抗原SAG5/SAG10 基因的扩增 | 第38页 |
| ·抗原SAG5/SAG10 亲水性、抗原指数等分析 | 第38页 |
| ·表面抗原SAG10 基因全长cDNA 的扩增 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因SAG5 和SAG10 在大肠杆菌中的表达 | 第40-54页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·菌株、载体 | 第40页 |
| ·引物 | 第40页 |
| ·常用分子生物学试剂和试剂盒 | 第40-41页 |
| ·常规化学试剂 | 第41页 |
| ·CaCl_2 法转化所需材料 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 所需材料 | 第41页 |
| ·免疫印迹所需材料 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白纯化所需材料 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·N 端不含信号肽序列的SAG5、SAG10 基因片段的扩增 | 第42-43页 |
| ·载体的制备 | 第43-44页 |
| ·pET-32a(+)、pMAL-c2X 与SAG5/SAG10 的连接 | 第44页 |
| ·用CaCl_2 法将连接产物转化入宿主细菌E. coli Rosetta(DE3) | 第44页 |
| ·转化克隆的PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·PCR 阳性克隆的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·SAG5/SAG10 在E.coli Rosetta (DE3)的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的大量表达和纯化 | 第46-47页 |
| ·蛋白质浓度与纯度的检测 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第四章 SAG5/SAG10 融合蛋白的免疫原性和保护性实验 | 第54-61页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 缩略语英文对照表 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简介 | 第71页 |
