| 缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 一、材料与方法 | 第17-35页 |
| (一) 实验材料 | 第17-19页 |
| 1.实验动物 | 第17页 |
| 2.试剂与材料 | 第17-18页 |
| 3.实验仪器设备 | 第18-19页 |
| (二) 实验方法 | 第19-34页 |
| 1.ShRNA序列及其制备 | 第19-20页 |
| 2.Atp6i-shRNA质粒载体的构建 | 第20-22页 |
| 3.过表达目的基因融合蛋白载体的构建 | 第22-25页 |
| 4.RNA干扰有效靶点Western Blot | 第25-27页 |
| 5.Atp6i-ShRNA慢病毒大量制备 | 第27-30页 |
| 6.OCL的体外分离和原代培养 | 第30-31页 |
| 7.诱导OCL的鉴定 | 第31-32页 |
| 8.细胞转染及观察 | 第32-33页 |
| 9.OCL的生化特性鉴定 | 第33-34页 |
| (三) 统计学方法 | 第34-35页 |
| 二、结果 | 第35-51页 |
| (一) Atp6i-shRNA质粒载体的鉴定 | 第35-39页 |
| (二) 过表达Atp6i基因融合蛋白的鉴定 | 第39-42页 |
| (三) RNA干扰有效靶点Western Blot | 第42-43页 |
| (四) 最佳Atp6i-shRNA慢病毒大量制备 | 第43页 |
| (五) 大鼠骨髓细胞诱导分化成OCL形态观察 | 第43-45页 |
| (六) OCL的鉴定 | 第45-47页 |
| 1.TRAP染色 | 第45-46页 |
| 2.镜下骨陷窝的形态特点 | 第46-47页 |
| (七) Atp6i-shRNA慢病毒转染前后OCL的变化 | 第47-51页 |
| 1.OCL形态变化 | 第47-48页 |
| 2.OCL生化特性变化 | 第48-51页 |
| 三、分析与讨论 | 第51-73页 |
| (一) 靶向Atp6i基因Atp6i-shRNA慢病毒制备过程 | 第51-55页 |
| 1.靶向Atp6i基因设计SiRNA靶点 | 第51-52页 |
| 2.化学合成SiRNA不利于长期研究 | 第52-53页 |
| 3.Atp6i-shRNA质粒PCR鉴定、测序及分析 | 第53-54页 |
| 4.设计过表达Atp6i基因融合蛋白载体及RNAi靶点Western Blot | 第54-55页 |
| 5.最佳RNA干扰Atp6i-shRNA质粒并制备Atp6i-shRNA慢病毒 | 第55页 |
| (二) OC是SANFH病程发展的关键因素 | 第55-57页 |
| (三) Atp6i基因对OC正常骨吸收功能的影响 | 第57-61页 |
| 1.质子泵是维持OC正常骨吸收功能的关键因素 | 第57-58页 |
| 2.V-ATPase结构与功能 | 第58-60页 |
| 3.Atp6i基因调控V-ATPase功能活性 | 第60-61页 |
| (四) RNAi在基因表达调控中发挥了重要作用 | 第61-64页 |
| 1.RNAi可以高效、高特异性的降解细胞内同源的mRNA来抑制同源基因的表达 | 第61-62页 |
| 2.RNAi技术在实验中的应用 | 第62-64页 |
| (五) 慢病毒载体作为基因转移王具应用于基因治疗 | 第64-67页 |
| 1.慢病毒载体结构 | 第65-66页 |
| 2.慢病毒载体制备 | 第66-67页 |
| 3.慢病毒载体应用 | 第67页 |
| (六) 慢病毒技术与RNAi技术联合应用 | 第67-68页 |
| (七) 骨髓诱导法建立OCL的体外培养体系 | 第68-71页 |
| 1.机械分离法得到的OC不能满足生化和分子生物学研究 | 第68-70页 |
| ·×10~(-8)mol/L的1,25-(OH)_2D_3成功诱导培养出OCL | 第70-71页 |
| (八) Atp6i-shRNA慢病毒转染后对OCL骨吸收功能的影响 | 第71-73页 |
| 四、结语 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 综述 | 第85-100页 |
| 相关试剂配制 | 第100-101页 |
