| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-17页 |
| 前言 | 第17-25页 |
| 实验与结果 | 第25-113页 |
| 第一部分 质粒DNA的制各及PELGE细胞毒性的评价 | 第25-52页 |
| 第一节 表达载体质粒的制备 | 第27-39页 |
| 1 仪器与试药 | 第27-29页 |
| ·商品试剂盒与主要试剂 | 第27页 |
| ·细菌培养基 | 第27-28页 |
| ·主要溶液的配制 | 第28页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| 2 实验方法与结果 | 第29-38页 |
| ·载体选择和引物设计 | 第29-35页 |
| ·质粒DNA的扩增 | 第35页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA的产量 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的纯度分析 | 第37-38页 |
| 3 小结和讨论 | 第38-39页 |
| ·基因治疗对质粒载体的要求 | 第38页 |
| ·基因治疗用质粒DNA的质量评价指标 | 第38-39页 |
| 第二节 传递载体细胞毒性的评价 | 第39-52页 |
| 1 仪器和试剂 | 第39-41页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要溶液的配制 | 第40页 |
| ·细胞株及原代细胞 | 第40-41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-45页 |
| ·细胞毒性试验 | 第41-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-49页 |
| ·细胞毒性实验结果 | 第45-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 第二部分 纳米多聚复合物载体系统的制备及其理化性质研究 | 第52-88页 |
| 1 仪器和试剂 | 第52-54页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| 2 实验方法与结果 | 第54-82页 |
| ·质粒DNA含量测定方法的建立 | 第54-57页 |
| ·载基因纳米粒的制备及其性质研究 | 第57-71页 |
| ·PPDs联合使用后物理化学特性的互补性 | 第71-82页 |
| 3 小结和讨论 | 第82-88页 |
| ·多聚复合物载体系统 | 第82-83页 |
| ·多聚复合物载体系统的制备方法 | 第83-84页 |
| ·多聚复合物载体系统性质研究 | 第84-88页 |
| 第三部分 载基因纳米多聚复合物体外细胞学实验研究 | 第88-113页 |
| 1 仪器与试剂 | 第88-93页 |
| ·试剂盒与主要试剂 | 第88-89页 |
| ·细胞株 | 第89页 |
| ·细胞培养基及主要溶液的配制 | 第89-92页 |
| ·实验仪器 | 第92-93页 |
| 2 实验方法 | 第93-101页 |
| ·细胞复苏 | 第93页 |
| ·细胞传代 | 第93页 |
| ·细胞转染 | 第93-94页 |
| ·pEGFP-C1-IL18转染效果的观察 | 第94页 |
| ·X-gal染色法观察pORF-LacZ的转染效果 | 第94-95页 |
| ·pORF-LacZ的转染率测定 | 第95-96页 |
| ·pGL3转染率的测定 | 第96-98页 |
| ·总蛋白(BCA)的测定 | 第98-100页 |
| ·空白PPDs的细胞毒性研究 | 第100页 |
| ·统计学分析 | 第100页 |
| ·Western blot检测mIL18在肿瘤细胞中的表达情况 | 第100-101页 |
| 3 实验结果 | 第101-108页 |
| ·pEGFP-C1-IL18转染效果的观察 | 第101页 |
| ·β-半乳糖苷酶在肿瘤细胞中的表达 | 第101-103页 |
| ·质粒pGL3的转染率测定 | 第103-106页 |
| ·空白纳米粒的细胞毒性评价 | 第106-108页 |
| ·免疫印迹检测细胞体外mIL-18的表达 | 第108页 |
| 4 小结和讨论 | 第108-113页 |
| ·多聚复合物纳米粒体外细胞学实验 | 第108页 |
| ·报告基因 | 第108-110页 |
| ·BCA总蛋白的测定 | 第110页 |
| ·四唑盐(MTT)比色法 | 第110-111页 |
| ·免疫印迹法 | 第111-113页 |
| 第四部分 载基因多聚复合物纳米粒冻干粉针剂的研究 | 第113-126页 |
| 1 仪器和试剂 | 第113-114页 |
| ·主要仪器 | 第113-114页 |
| ·主要试剂 | 第114页 |
| 2 方法与结果 | 第114-123页 |
| ·PPDs冻干针剂的处方及制备工艺研究 | 第114-117页 |
| ·PPDs冻干粉针剂质量评价 | 第117-123页 |
| 3 小结与讨论 | 第123-126页 |
| ·冻干后PPDs的基本特征 | 第123页 |
| ·冷冻干燥法 | 第123-124页 |
| ·冻干保护剂的作用 | 第124页 |
| ·冻干PPDs针剂中DNA的完整性 | 第124-126页 |
| 第五部分 mIL-18-PPDs冻干粉针剂对肺转移肿瘤小鼠的治疗实验研究 | 第126-144页 |
| 1 仪器与试药 | 第127-128页 |
| ·实验设备 | 第127-128页 |
| ·主要试剂 | 第128页 |
| ·实验动物 | 第128页 |
| ·细胞株 | 第128页 |
| 2 实验方法与结果 | 第128-133页 |
| ·pEGFP-C1-mIL-18-PPDs冻干粉针剂的制备 | 第128-129页 |
| ·小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第129页 |
| ·预试 | 第129页 |
| ·给药 | 第129-130页 |
| ·荷瘤小鼠的治疗效果观察 | 第130页 |
| ·抗结肠癌肺转移作用观察 | 第130-132页 |
| ·组织学及病理学观察 | 第132-133页 |
| ·荷瘤小鼠的生存周期观察 | 第133页 |
| ·统计学分析 | 第133页 |
| 3 实验结果 | 第133-141页 |
| ·小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第133-137页 |
| ·pEGFP-C1-mIL-18-PPDs冻干粉针剂抑制结肠癌肺转移及肿瘤的生长 | 第137-141页 |
| ·pEGFP-C1-mIL-18-PPDs冻干粉针剂可延长荷瘤小鼠的生存周期 | 第141页 |
| 4 小结和讨论 | 第141-144页 |
| ·小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第141-142页 |
| ·化学治疗 | 第142页 |
| ·联合用药 | 第142-144页 |
| 第六部分 叶酸修饰纳米复合物的合成及其靶向性研究 | 第144-167页 |
| 1 仪器与试药 | 第145-147页 |
| ·主要试剂 | 第145-146页 |
| ·主要试剂去水处理 | 第146页 |
| ·细胞株 | 第146页 |
| ·仪器 | 第146-147页 |
| 2 实验方法 | 第147-159页 |
| ·聚合物的合成 | 第147-149页 |
| ·聚合物材料的结构鉴定 | 第149-157页 |
| ·叶酸修饰纳米复合物靶向性细胞摄取研究 | 第157-158页 |
| ·叶酸修饰纳米复合物靶向性细胞转染研究 | 第158-159页 |
| 3 结果与讨论 | 第159-167页 |
| ·聚合物的合成 | 第159-161页 |
| ·纳米复合物的细胞摄取 | 第161-163页 |
| ·纳米复合物的细胞转染水平 | 第163-167页 |
| 结论 | 第167-170页 |
| 综述 | 第170-201页 |
| 致谢 | 第201-203页 |
| 作者简介 | 第203-207页 |
