| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-10页 |
| 1 绪论 | 第10-28页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·AChE的研究进展 | 第11-20页 |
| ·AChE的结构及特点 | 第11-15页 |
| ·AChE的生物学活性及其临床应用 | 第15-17页 |
| ·AChE检测农残原理 | 第17页 |
| ·AChE研究现状 | 第17-18页 |
| ·DmAChE结构及特点 | 第18-20页 |
| ·AChE的制备 | 第20页 |
| ·AChE的分离纯化 | 第20页 |
| ·基因工程方法制备AChE | 第20页 |
| ·基因工程表达系统的特点 | 第20-23页 |
| ·细菌 | 第20-21页 |
| ·酵母 | 第21-22页 |
| ·昆虫细胞 | 第22-23页 |
| ·农药残留问题的研究现状 | 第23-24页 |
| ·农药作用机理 | 第23页 |
| ·常用农残检测方法综述 | 第23-24页 |
| ·生物传感器的研究现状 | 第24-26页 |
| ·生物传感器原理及研究现状 | 第24页 |
| ·酶传感器研究现状 | 第24-26页 |
| ·酶传感器的发展方向 | 第26页 |
| ·立论依据 | 第26页 |
| ·研究内容与方法 | 第26-28页 |
| ·DmAChE基因的PCR扩增 | 第27页 |
| ·pPIC9K-DmAChE重组表达质粒的构建 | 第27页 |
| ·P.pastoris/pPIC9K-DmAChE工程菌株的构建与筛选 | 第27页 |
| ·重组 KM71的表达 | 第27-28页 |
| 2 DmACh在P.pastoris中的表达 | 第28-44页 |
| ·材料与仪器 | 第28-31页 |
| ·质粒、菌株 | 第28-29页 |
| ·实验试剂 | 第29-30页 |
| ·试验仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-39页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·DmAchE基因的PCR扩增 | 第31-34页 |
| ·pPIC9K-DmAChE重组表达质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·P.pastoris/pPIC9K-DmAchE工程菌株的构建与筛选 | 第36-38页 |
| ·重组 KM71的表达 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-42页 |
| ·DmAchE基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·pPIC9K-DmAChE重组表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·Pichia pastoris/pPIC9K-DmAchE工程菌株的筛选 | 第41页 |
| ·重组 KM71的表达 | 第41-42页 |
| ·实验小结 | 第42-44页 |
| ·酶切影响重组质粒构建效率 | 第42-43页 |
| ·高保真 DNA聚合酶的使用 | 第43页 |
| ·线性化重组质粒 | 第43-44页 |
| 3 讨论与总结 | 第44-50页 |
| ·不同转化方法的效率及评价 | 第44-45页 |
| ·CaCl_2法 | 第44页 |
| ·电转化法 | 第44-45页 |
| ·影响AChE在 P.pastoris中表达的因素 | 第45-47页 |
| ·AChE活性测定方法 | 第47页 |
| ·比色法 | 第47页 |
| ·电化学法 | 第47页 |
| ·研究方法的评价 | 第47-48页 |
| ·结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 独创性声明 | 第57页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第57页 |
