| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-31页 |
| 一、禽流感病毒及其研究进展 | 第12-23页 |
| 1.AIV的致病性及危害 | 第12-13页 |
| 2.禽流感的公共卫生意义 | 第13-16页 |
| 3.病原 | 第16-20页 |
| ·形态和命名 | 第16页 |
| ·AIV分子生物学特性 | 第16-18页 |
| ·复制和表达 | 第18-19页 |
| ·AIV及其毒力变异的分子基础 | 第19页 |
| ·流感病毒表面蛋白HA和NA对致病力的影响 | 第19-20页 |
| 4.禽流感疫苗研究进展 | 第20-23页 |
| ·灭活疫苗 | 第21页 |
| ·亚单位疫苗 | 第21页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第21页 |
| ·反义基因工程疫苗 | 第21-23页 |
| ·DNA疫苗 | 第23页 |
| 二、核酸疫苗研究进展 | 第23-30页 |
| 1.核酸疫苗的产生背景 | 第24页 |
| 2.核酸疫苗的免疫机理 | 第24-25页 |
| ·DNA疫苗诱导产生的CTL反应机制 | 第24-25页 |
| ·DNA疫苗诱导产生抗体反应的机制 | 第25页 |
| 3.DNA疫苗的优化策略 | 第25-29页 |
| ·佐剂 | 第25-27页 |
| ·优化表达载体,提高DNA疫苗免疫效力 | 第27页 |
| ·优化抗原基因提高DNA疫苗免疫效力 | 第27-28页 |
| ·免疫途径和程序的优化 | 第28-29页 |
| 4.DNA疫苗最新进展 | 第29页 |
| 5.核酸疫苗的发展前景 | 第29-30页 |
| 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 实验一 共表达H5N1亚型HPAIV HA基因和NA基因DNA疫苗质粒的构建与体外表达 | 第31-44页 |
| 1.材料与方法 | 第32-37页 |
| ·菌种及质粒 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第33页 |
| ·酶及相关试剂 | 第33页 |
| ·培养液 | 第33-34页 |
| ·H5亚型阳性血清 | 第34页 |
| ·二抗 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·质粒载体处理 | 第34页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第34页 |
| ·连接与转化 | 第34-35页 |
| ·小量制备质粒DNA | 第35页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第35页 |
| ·质粒pCANA、pCINA、pCAoptiH5N1和pCIoptiH5N1的在293T细胞的瞬时表达 | 第35-37页 |
| 2.结果 | 第37-43页 |
| ·DNA疫苗质粒pCINA、pCANA、pCIoptiH5N1和pCAoptiH5N1的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·DNA疫苗质粒pCINA、pCAGGNA、pCIoptiH5N1和pCAGGoptiH5N1的PCR鉴定 | 第38-43页 |
| ·不同质粒转染293T细胞48h后的间接免疫荧光结果 | 第43页 |
| ·HA蛋白和NA蛋白在293T细胞中的表达产物检测 | 第43页 |
| 3.讨论 | 第43-44页 |
| 实验二 共表达H5N1亚型HA基因和NA基因DNA疫苗免疫对H5亚型禽流感免疫保护效果 | 第44-58页 |
| 1.材料与方法 | 第45-47页 |
| ·病毒 | 第45页 |
| ·SPF鸡胚和SPF鸡 | 第45页 |
| ·DNA疫苗质粒 | 第45页 |
| ·HI阳性抗原 | 第45页 |
| ·DNA疫苗质粒的大量制备及其纯化 | 第45-46页 |
| ·SPF鸡的免疫 | 第46页 |
| ·攻毒 | 第46页 |
| ·抗体检测 | 第46-47页 |
| ·病毒分离与滴定 | 第47页 |
| 2.实验结果：不同DNA疫苗单独、混合免疫对H5N1亚型HPAIV攻击的免疫保护结果 | 第47-55页 |
| ·HI抗体转阳 | 第47-48页 |
| ·HI抗体水平 | 第48-52页 |
| ·病毒分离滴定结果 | 第52-54页 |
| ·发病和死亡情况 | 第54-55页 |
| 3.讨论 | 第55-58页 |
| 实验三 共表达H5N1亚型HA基因和NA基因DNA疫苗免疫对N1亚型禽流感免疫保护效果 | 第58-70页 |
| 1.材料与方法 | 第59-60页 |
| ·病毒 | 第59页 |
| ·SPF鸡胚和SPF鸡 | 第59页 |
| ·DNA疫苗质粒 | 第59页 |
| ·HI阳性抗原 | 第59页 |
| ·DNA疫苗质粒的大量制备及其纯化 | 第59页 |
| ·SPF鸡的免疫 | 第59-60页 |
| ·攻毒 | 第60页 |
| ·抗体检测 | 第60页 |
| ·病毒分离与滴定 | 第60页 |
| 2.实验结果：不同DNA疫苗单独、混合免疫对H7N1亚型HPAIV攻击的免疫保护结果 | 第60-68页 |
| ·HI抗体 | 第61-65页 |
| ·病毒分离滴定结果 | 第65-66页 |
| ·发病和死亡情况 | 第66-68页 |
| 3.讨论 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文: | 第79页 |
