转基因番茄标记基因剔除及翻译起始因子4E基因顺化植物的病毒抗性
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-53页 |
| ·课题的提出 | 第15-16页 |
| ·标记基因安全性策略 | 第16-28页 |
| ·直接转化筛选法 | 第16-17页 |
| ·采用安全标记基因 | 第17-19页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因 | 第17-18页 |
| ·葡糖醛酸酶基因 | 第18页 |
| ·木糖异构酶基因 | 第18页 |
| ·磷酸甘露糖异构酶基因 | 第18页 |
| ·ipt基因和rol基因 | 第18-19页 |
| ·甜椒类铁氧还蛋白基因 | 第19页 |
| ·剔除标记法 | 第19-27页 |
| ·共转化 | 第20页 |
| ·转座子 | 第20-22页 |
| ·同源重组 | 第22-23页 |
| ·位点专一重组系统 | 第23-27页 |
| ·标记基因安全性策略发展趋势 | 第27-28页 |
| ·植物基因化学诱导表达系统 | 第28-34页 |
| ·植物基因化学诱导表达类型 | 第28-33页 |
| ·四环素诱导系统 | 第28-29页 |
| ·四环素失活系统 | 第29页 |
| ·基于糖皮质素受体的类固醇诱导系统 | 第29页 |
| ·基于雌激素受体的类固醇诱导系统 | 第29-30页 |
| ·双向调控系统 | 第30页 |
| ·基于脱皮激素受体的杀虫剂诱导系统 | 第30-31页 |
| ·基于AlcR的乙醇诱导系统 | 第31页 |
| ·基于ACEI的铜诱导系统 | 第31-33页 |
| ·化学诱导系统的应用 | 第33-34页 |
| ·特异性超量表达研究 | 第33页 |
| ·功能抑制研究 | 第33页 |
| ·特定性功能互补 | 第33页 |
| ·分离下游靶基因 | 第33-34页 |
| ·无标记遗传转化 | 第34页 |
| ·Bt抗虫转基因植物研究进展 | 第34-36页 |
| ·植物抗病毒基因工程研究进展 | 第36-42页 |
| ·病毒来源的抗性基因策略 | 第36-39页 |
| ·外壳蛋白基因介导的抗性 | 第36-37页 |
| ·利用病毒复制酶基因的抗性 | 第37-38页 |
| ·运动蛋白基因 | 第38页 |
| ·RNA介导的抗性策略 | 第38-39页 |
| ·非植物病毒基因介导的抗性策略 | 第39-42页 |
| ·α、β干扰素基因 | 第39页 |
| ·利用核酶基因抗性策略 | 第39-40页 |
| ·植物自身基因介导的抗病毒基因策略 | 第40-42页 |
| ·植物真核翻译起始因子4E研究进展 | 第42-51页 |
| ·真核翻译起始因子4E与蛋白质翻译起始 | 第42-45页 |
| ·真核细胞蛋白质翻译起始机制 | 第45-47页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒基因组 | 第47-49页 |
| ·真核翻译起始因子4E介导的抗病毒机理 | 第49-51页 |
| ·本研究的目的与内容 | 第51-53页 |
| 第二章 材料与方法 | 第53-67页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第53页 |
| ·引物设计和序列分析 | 第53页 |
| ·反转录PCR | 第53-55页 |
| ·总RNA的提取 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR | 第54-55页 |
| ·植物表达载体构建 | 第55-59页 |
| ·正义表达载体构建 | 第55-56页 |
| ·RNAi抑制表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第59-60页 |
| ·辣椒的遗传转化 | 第60页 |
| ·基因工程植株的分子检测 | 第60-64页 |
| ·转化再生植株的PCR检测 | 第60-61页 |
| ·基因工程植株的Southern杂交分析 | 第61-62页 |
| ·基因工程植株的Northern杂交分析 | 第62-64页 |
| ·基因工程植株的ELISA分析 | 第64-65页 |
| ·基因工程植株抗虫性初步鉴定 | 第65页 |
| ·基因工程植物的病毒接种及抗性鉴定 | 第65-67页 |
| ·病毒来源 | 第65-66页 |
| ·接种方法 | 第66页 |
| ·病毒RNA RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| 第三章 从转Bt基因番茄中诱导剔除标记基因 | 第67-87页 |
| ·前言 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68-71页 |
| ·植物遗传转化载体的构建 | 第68-71页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第71页 |
| ·转基因番茄的分子检测 | 第71页 |
| ·转基因番茄的ELISA分析 | 第71页 |
| ·转基因番茄的抗虫性鉴定 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-82页 |
| ·植物转化载体的构建 | 第71-73页 |
| ·转基因植株的获得 | 第73-75页 |
| ·转基因番茄植株的分子检测 | 第75-79页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第75-76页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第76页 |
| ·转基因植株的遗传分析 | 第76-79页 |
| ·转基因植株的Northern杂交分析 | 第79页 |
| ·转基因植株的ELISA分析 | 第79-81页 |
| ·转基因植株的抗虫性初步鉴定 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-87页 |
| ·标记基因的诱导自主剔除 | 第82-84页 |
| ·Bt蛋白抗虫的有效性 | 第84-85页 |
| ·标记基因的其他安全性策略 | 第85-87页 |
| 第四章 真核翻译起始因子4E介导抗病毒特性研究 | 第87-114页 |
| ·前言 | 第87-88页 |
| ·材料与方法 | 第88-90页 |
| ·翻译起始因子4E基因克隆 | 第88页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第88页 |
| ·植物干涉表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·番茄和辣椒的遗传顺化 | 第89页 |
| ·基因顺化植株的分子检测 | 第89页 |
| ·基因顺化植株病毒接种和抗性鉴定 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-109页 |
| ·翻译起始因子4E基因克隆 | 第90-93页 |
| ·植物正义表达载体构建 | 第93-95页 |
| ·植物干涉载体的构建 | 第95-96页 |
| ·基因顺化植株的获得 | 第96-97页 |
| ·基因顺化植株的PCR检测 | 第97页 |
| ·顺化植株的Southern杂交检测 | 第97-98页 |
| ·顺化植株的RT-PCR检测 | 第98-100页 |
| ·辣椒正义基因顺化对内源基因表达的影响 | 第98-100页 |
| ·RNAi对内源基因表达的影响 | 第100页 |
| ·eIF4E干涉对番茄植株的病毒抗性的影响 | 第100-103页 |
| ·基因顺化植株接种后症状表现 | 第100-102页 |
| ·病毒RNA的RT-PCR分析 | 第102-103页 |
| ·eIF4E正义基因顺化番茄植株的病毒抗性 | 第103-107页 |
| ·基因顺化番茄接种后症状表现 | 第103-105页 |
| ·病毒RNA RT-PCR分析 | 第105-107页 |
| ·辣椒顺化植株的抗病毒特性的初步观察 | 第107-109页 |
| ·讨论 | 第109-114页 |
| ·关于本实验的研究策略 | 第109-110页 |
| ·病毒检测技术 | 第110页 |
| ·翻译起始因子的在病毒侵染中的作用 | 第110-113页 |
| ·抗病毒基因工程的可行性 | 第113-114页 |
| 结语 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 附录 | 第137-140页 |
| 附录一:登记基因信息 | 第137-140页 |
| 附录二:博士在读期间发表的论文及会议摘要 | 第140页 |
