| 目录 | 第1-7页 |
| 全文摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 英文名称及缩写词 | 第13-15页 |
| 第一篇 文献综述 伪狂犬病病毒分子生物学研究进展 | 第15-44页 |
| 1.PRV的分子生物学 | 第15-28页 |
| ·PRV的命名与分类地位 | 第15-16页 |
| ·PRV的病毒粒子结构 | 第16-17页 |
| ·PRV的基因组 | 第17-24页 |
| ·PRV的保守基因 | 第21页 |
| ·衣壳蛋白 | 第21页 |
| ·皮层蛋白 | 第21页 |
| ·囊膜蛋白 | 第21-22页 |
| ·PRV基因的转录 | 第22-24页 |
| ·病毒复制周期 | 第24-27页 |
| ·潜伏性和嗜神经性 | 第27-28页 |
| 2.伪狂犬病的疫苗研究与根除计划 | 第28-33页 |
| ·PRV疫苗研究进展 | 第28-31页 |
| ·传统疫苗 | 第28-29页 |
| ·亚单位疫苗 | 第29页 |
| ·基因疫苗 | 第29页 |
| ·基因缺失标记疫苗 | 第29-31页 |
| ·以PRV为载体的重组疫苗 | 第31页 |
| ·PRV的根除计划 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-44页 |
| 第二篇 实验研究 | 第44-102页 |
| 第一章 表达绿色荧光蛋白及包含LoxP位点的重组伪狂犬病病毒的构建 | 第44-55页 |
| 1 材料和方法 | 第45-47页 |
| ·质粒、受体菌、毒株和细胞 | 第45页 |
| ·主要试剂与材料 | 第45页 |
| ·转移载体pSKLR-G-LoxP的构建 | 第45页 |
| ·表达GFP的重组病毒S03109的筛选与纯化 | 第45-46页 |
| ·S03109的鉴定 | 第46页 |
| ·S03109的细胞培养特性 | 第46页 |
| ·S03109对BALB／c小鼠的毒力及免疫保护作用 | 第46-47页 |
| 2.结果 | 第47-51页 |
| ·转移载体pSKLR-G-LoxP的构建 | 第47页 |
| ·重组病毒S03109的筛选及鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组病毒S03109的细胞培养特性 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| Abstract | 第54-55页 |
| 第二章 Cre／LoxP介导的GFP报告基因从伪狂犬病病毒基因组中的删除 | 第55-66页 |
| 1 材料和方法 | 第56-57页 |
| ·质粒、受体菌、毒株和细胞 | 第56页 |
| ·主要试剂与材料 | 第56页 |
| ·利用Cre酶除去S03109的GFP表达盒 | 第56页 |
| ·S0419的鉴定 | 第56-57页 |
| ·S0419的细胞培养特性 | 第57页 |
| ·S0419对BALB／c小鼠的毒力及免疫保护作用 | 第57页 |
| 2.结果 | 第57-62页 |
| ·重组病毒S0419的筛选及鉴定 | 第57-59页 |
| ·重组病毒S03109与S0419的细胞培养特性 | 第59-61页 |
| ·S03109与S0419对BALB／c小鼠的毒力及免疫保护作用 | 第61-62页 |
| 3.讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| Abstract | 第65-66页 |
| 第三章 表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组PRV研究中的应用 | 第66-78页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| ·质粒、受体菌、毒株和细胞 | 第67页 |
| ·主要试剂与材料 | 第67页 |
| ·双顺反子载体pIREShyg-Cre的构建 | 第67页 |
| ·表达Cre的BHK-21细胞系的构建及鉴定 | 第67-68页 |
| ·PRV S03109株感染实验 | 第68页 |
| ·表达Cre的HEK-293A细胞系的构建 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-73页 |
| ·双顺反子载体pIREShyg-Cre的构建及鉴定 | 第69页 |
| ·表达Cre的BHK-21细胞系的构建及鉴定 | 第69-70页 |
| ·PRV S03109株感染试验 | 第70-72页 |
| ·293A-Cre的构建及PRV S03109株感染试验 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献： | 第75-77页 |
| Abstract | 第77-78页 |
| 第四章 伪狂犬病病毒全基因组感染性克隆的构建 | 第78-89页 |
| 1 材料和方法 | 第78-81页 |
| ·质粒、受体菌、毒株和细胞 | 第78页 |
| ·主要试剂与材料 | 第78-79页 |
| ·pGS275质粒的提取与293A-Cre细胞转染条件的优化 | 第79页 |
| ·表达LacZ的重组病毒S06293的筛选与纯化 | 第79页 |
| ·S06293的鉴定 | 第79页 |
| ·S03109环化基因组的提取和电转化DH10B | 第79-80页 |
| ·PCR鉴定PRV-BAC | 第80页 |
| ·PRV-BAC转染真核细胞及感染性子代病毒的获得 | 第80页 |
| ·S06293的细胞培养特性 | 第80-81页 |
| 2.结果 | 第81-85页 |
| ·pGS275的提取与转染条件的优化 | 第81-82页 |
| ·S06293的筛选及鉴定 | 第82-83页 |
| ·PRV-BAC的获得及鉴定 | 第83页 |
| ·S06293的细胞培养特性 | 第83-85页 |
| 3.讨论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| Abstract | 第88-89页 |
| 第五章 利用PRV-BAC构建gE缺失的重组病毒 | 第89-102页 |
| 1 材料和方法 | 第89-94页 |
| ·质粒、受体菌、毒株和细胞 | 第89-90页 |
| ·主要试剂与材料 | 第90页 |
| ·转移载体pGS284-gE的构建 | 第90-93页 |
| ·技术路线 | 第90页 |
| ·引物设计： | 第90-91页 |
| ·PCR反应： | 第91页 |
| ·PCR产物纯化 | 第91页 |
| ·限制性核酸内切酶酶切及载体的去磷酸化 | 第91-92页 |
| ·酶切产物纯化与连接 | 第92页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第92页 |
| ·质粒提取 | 第92页 |
| ·克隆鉴定 | 第92-93页 |
| ·等位交换修饰PRV-BAC | 第93-94页 |
| ·重组病毒的鉴定及生物学特性 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-99页 |
| ·同源重组臂的PCR克隆 | 第94页 |
| ·等位交换载体pGS284-gE的构建 | 第94-98页 |
| ·等位交换修饰PRV-BAC | 第98页 |
| ·gE缺失重组病毒S0645的获得 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-101页 |
| Abstract | 第101-102页 |
| 全文总结 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
