| 本方所用缩略语 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-42页 |
| 第一节传染性海绵状脑病研究简况 | 第13-35页 |
| 1 传染性海绵状脑病简史 | 第13-14页 |
| 2 疯牛病概况 | 第14-25页 |
| 3 羊痒病 | 第25-26页 |
| 4 朊毒体(Prion)的特性 | 第26-27页 |
| 5 朊毒体与哺乳动物朊蛋白 | 第27-28页 |
| 6 PrP~(Sc)的形成 | 第28-31页 |
| 7 鱼类PrP 相关蛋白的研究概况 | 第31-33页 |
| 8 鱼类其他PrP 相关蛋白的研究 | 第33-34页 |
| 9 哺乳动物PrP 和鱼类PrP 相关蛋白的比较 | 第34-35页 |
| 第二节 朊蛋白 PRNP 基因多态性与 TSE 的关系 | 第35-40页 |
| 1 人的PRNP 基因多态性与人的TSE | 第37-39页 |
| 2 羊的PRNP 基因多态性与羊痒病 | 第39-40页 |
| 3 鹿的PRNP 基因多态性与CWD | 第40页 |
| 第三节 绵羊 PRNP 基因分型方法研究概况 | 第40-41页 |
| 第四节 本课题的立项依据 | 第41-42页 |
| 第二章 中国主要地方绵羊品种 PRNP 基因多态性研究 | 第42-72页 |
| 第一节 中国主要地方绵羊品种 PRNP 基因多态性研究 | 第42-60页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·绵羊样品 | 第43页 |
| ·绵羊抗凝血样的采集和基因组的提取 | 第43-44页 |
| ·PCR 扩增绵羊PRNP 基因 | 第44-45页 |
| ·PRNP 基因序列测定 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-60页 |
| 第二节 TaqMan 探针实时荧光 PCR 检测绵羊 PRNP 基因多态性方法的建立及在 PRNP 基因分型中的应用 | 第60-72页 |
| 1 材料与方法 | 第60-63页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·绵羊抗凝血样的采集和基因组的提取 | 第60页 |
| ·引物的设计及探针合成 | 第60-62页 |
| ·TaqMan 探针实时荧光PCR 进行SNP 检测的工作原理 | 第62页 |
| ·DNA、引物及探针用量 | 第62-63页 |
| ·荧光定量PCR 检测PRNP 基因多态性反应体系及程序 | 第63页 |
| ·4074、615、12、513 四个突变位点的SNP 分型参考样本Real-time | 第63页 |
| ·TaqMan 探针 Real-time PCR 检测绵羊 PRNP 基因多态性方法的应用 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-68页 |
| ·407 位点定点突变实验报告 | 第63页 |
| ·407、461、512、513 四个位点Real-time PCR 检测情况 | 第63-66页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测绵羊PRNP 基因多态性方法的应用 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-72页 |
| 第三章 绵羊 ARQ 基因型 PrP 前体蛋白基因的克隆及表达 | 第72-100页 |
| 第一节 绵羊 ARQ 基因型 PrP 前体蛋白基因的克隆及原核表达 | 第73-87页 |
| 1 材料与方法 | 第73-81页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·菌株与质粒 | 第73页 |
| ·绵羊抗凝血样的采集和基因组的提取 | 第73-74页 |
| ·PCR 扩增绵羊PRNP 基因 | 第74-75页 |
| ·PrP 基因前体蛋白表达质粒的构建及鉴定 | 第75-80页 |
| ·PrP 基因前体蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第80页 |
| ·表达产物的特异性检测 | 第80-81页 |
| 2 结果 | 第81-85页 |
| ·PCR 扩增绵羊PrP 基因 | 第81-82页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第82-83页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第83-84页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第84-85页 |
| ·重组蛋白的Western blot 分析 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第二节 绵羊 PrP 前体蛋白基因真核表达载体的构建及汉逊酵母中的初步表达 | 第87-100页 |
| 1 材料与方法 | 第87-92页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·菌株与质粒 | 第87页 |
| ·绵羊抗凝血样的采集和基因组的提取 | 第87页 |
| ·PCR 扩增绵羊PrP 基因 | 第87-88页 |
| ·PrP 基因前体蛋白表达质粒的构建及鉴定 | 第88页 |
| ·PrP 基因前体蛋白在多形汉逊酵母中的表达 | 第88-91页 |
| ·表达产物的特异性检测 | 第91-92页 |
| 2 结果 | 第92-99页 |
| ·PCR 扩增绵羊PrP 基因 | 第92-93页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第93-97页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第97-98页 |
| ·重组蛋白在多形汉逊酵母中的表达和Western blot 分析 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-100页 |
| 总结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 附录 | 第108-118页 |
| 附1 绵羊PRNP407 位点定点突变实验报告 | 第108-110页 |
| 附2 重组质粒pET28a-OPrP 测序结果图 | 第110-112页 |
| 附3 重组质粒pGEMT-OPrP 测序结果图 | 第112-114页 |
| 附4 溶液配制 | 第114-118页 |
| ·多态性研究中的主要试剂配制 | 第114-115页 |
| ·原核表达中主要试剂的配制 | 第115-116页 |
| ·酵母表达中主要试剂的配制 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 发表论文情况 | 第119页 |
