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根癌农杆菌介导的AP1基因转化菊花的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
1 引言第11-33页
   ·菊花基因工程研究进展第11-22页
     ·菊花受体系统的研究第12-14页
     ·菊花遗传转化体系的建立第14-20页
     ·菊花基因工程中存在的问题第20-21页
       ·提高转化率第20页
       ·提高对转化外源基因表达的调控能力第20-21页
     ·展望第21-22页
   ·高等植物成花机理研究进展第22-31页
     ·花发育概述第22-28页
       ·花诱导第22-23页
       ·花发育的基因调控第23-26页
       ·花器官形成的基因调控第26-28页
     ·花发育调控基因的结构特征与作用机制第28页
       ·花发育调控基因的结构特征第28页
       ·花发育调控基因的作用机制第28页
     ·花发育调控基因在国内外的应用研究进展第28-29页
     ·展望第29-31页
   ·本课题研究的目的意义和主要内容第31-33页
2 菊花离体再生系统的建立第33-60页
   ·材料和方法第33-36页
     ·材料第33-34页
     ·试验方法第34-36页
   ·结果与分析第36-55页
     ·不同灭菌时间和不同接种时间对外植体启动培养的影响第36-37页
     ·不同培养基对菊花增殖培养的影响第37-39页
     ·不同培养基对菊花生长的影响第39-41页
     ·不同生长调节剂对不同菊花品种叶片外植体再生的影响第41-49页
       ·不同生长调节剂组合对菊花叶片外植体再生的影响第41-44页
       ·不同浓度6-BA和NAA对不同菊花品种叶片外植体再生的影响第44-48页
       ·影响‘紫妍’叶片外植体褐化和再生率的因素第48-49页
     ·Vc、活性炭对‘紫妍’叶片外植体再生的影响第49-50页
     ·不同苗龄及叶片着生部位对不定芽再生的影响第50-51页
     ·AgNO_3对菊花叶片外植体再生的影响第51-52页
     ·不同外植体不定芽再生能力比较第52-54页
     ·继代培养对菊花叶片形态发生能力的影响第54-55页
   ·结论与讨论第55-60页
3 植物表达载体pBI-AP1的构建第60-71页
   ·材料和方法第60-66页
     ·材料第60-61页
     ·方法第61-66页
   ·结果和分析第66-71页
     ·目的片段测序及酶切图分析第66-68页
     ·P ZEROBLUNT Ⅱ ToPo、pBI121质粒的酶切及目的片段回收第68页
     ·重组质粒的酶切鉴定第68-69页
     ·植物表达载体向农杆菌转化和转化子的鉴定第69-71页
4 菊花遗传转化体系的建立和转基因植株的获得第71-96页
   ·材料和方法第71-72页
     ·材料第71页
     ·根癌农杆菌菌株及载体第71页
     ·培养基及添加成分第71页
     ·分子生物学试剂及缓冲液试剂的配制第71页
     ·主要仪器和设备第71-72页
   ·方法第72-76页
     ·抗生素Cef、Carb对农杆菌的抑菌试验第72页
     ·不同抗生素对菊花叶片外植体再生和试管苗生根的影响第72-73页
     ·叶盘法遗传转化及筛选第73-74页
     ·影响遗传转化体系因素的筛选和优化第74-75页
     ·应用微弹轰击辅助农杆菌转化第75-76页
   ·结果与分析第76-91页
     ·羧卞青霉素和头孢霉素对农杆菌的抑菌效果第76-77页
     ·不同抗生素对菊花叶片外植体再生和试管苗生根的影响第77-83页
       ·不同选择抗生素对菊花叶片外植体再生的影响第77-79页
       ·不同抗生素对菊花生根的影响第79-80页
       ·羧卞青霉素和头孢霉素对叶片再生的影响第80-81页
       ·羧卞青霉素和头孢霉素对菊花无菌苗生长的影响第81-83页
     ·菊花遗传转化体系的优化第83-88页
       ·预培养时间的确定第83-84页
       ·农杆菌浓度、侵染时间的确定第84-85页
       ·共培养温度和时间的确定第85-86页
       ·选择压对转化率的影响第86-88页
     ·转基因植株的获得第88-90页
     ·微弹轰击辅助农杆菌转化第90-91页
   ·讨论与结论第91-96页
5 转AP1基因植株的检测第96-111页
   ·材料和方法第96-101页
     ·材料第96页
     ·方法第96-101页
   ·结果与分析第101-108页
     ·转基因植株的GUS检测第101-102页
     ·转AP1基因植株的PCR检测第102-103页
     ·探针标记效率的检测第103页
     ·转基因植株的PCR-Southern检测第103页
     ·转基因植株的Southern-blotting杂交分析第103-104页
     ·转基因菊花苗叶片再生能力鉴定第104-105页
     ·转AP1基因抗性株的性状分析第105-108页
       ·转基因菊花的营养生长第105页
       ·转基因菊花开花特性第105-108页
   ·结论与讨论第108-111页
6 结论第111-113页
参考文献第113-127页
附录第127-132页
个人简历第132-133页
导师简介第133-134页
致谢第134页

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