| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 猪轮状病毒病概述 | 第12-14页 |
| ·猪轮状病毒病的历史 | 第12页 |
| ·猪轮状病毒病的流行病学 | 第12页 |
| ·猪轮状病毒病的临床症状 | 第12-13页 |
| ·猪轮状病毒病的理化特性 | 第13页 |
| ·猪轮状病毒病的分子结构及功能 | 第13-14页 |
| ·猪轮状病毒病的分型 | 第14页 |
| 2 轮状病毒诊断概述 | 第14-15页 |
| ·临床诊断 | 第14页 |
| ·电镜观察诊断 | 第14-15页 |
| ·ELISA诊断 | 第15页 |
| 3 猪轮状病毒疫苗概况 | 第15-17页 |
| ·传统疫苗 | 第15-16页 |
| ·亚单位疫苗 | 第16页 |
| ·DNA疫苗 | 第16-17页 |
| 4 以沙门氏菌为载体的口服DNA疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| ·沙门氏菌的基因缺失减毒 | 第17页 |
| ·aro(aroA、aroC、aroD)基因缺失 | 第17-18页 |
| ·asd基因缺失 | 第18页 |
| ·携带DNA疫苗的减毒沙门氏菌作为运送载体 | 第18-19页 |
| 5 本研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第20-52页 |
| 1 试验材料 | 第20页 |
| ·生物材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| 2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 3 方法 | 第21-52页 |
| ·PRV VP7、NSP4基因的克隆及鉴定 | 第21-25页 |
| ·PRV VP7蛋白原核表达及纯化 | 第25-32页 |
| ·PRV NSP4蛋白原核表达及纯化 | 第32-35页 |
| ·兔抗PRV VP7、NSP4蛋白免疫血清的制备 | 第35-36页 |
| ·PRV VP7、NSP4基因真核表达质粒的构建及鉴定 | 第36-46页 |
| ·重组沙门氏菌的构建及部分生物学性质鉴定 | 第46-49页 |
| ·重组沙门氏菌小鼠免疫试验 | 第49-52页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第52-75页 |
| 1 PRV VP7和NSP4基因的克隆鉴定及分析结果 | 第52-53页 |
| ·VP7基因的克隆及序列分析结果 | 第52页 |
| ·NSP4基因的克隆及序列分析结果 | 第52-53页 |
| 2 PRV VP7和NSP4蛋白表达及抗血清的制备结果 | 第53-59页 |
| ·VP7基因原核表达质粒的构建及VP7蛋白表达结果 | 第53-56页 |
| ·NSP4基因原核表达质粒的构建及NSP4蛋白表达结果 | 第56-58页 |
| ·兔抗NSP4和VP7蛋白特异性IgG抗体水平ELISA检测结果 | 第58-59页 |
| 3 构建PRV VP7和NSP4基因真核表达质粒的鉴定结果 | 第59-63页 |
| ·真核表达载体质粒质粒pVAX1-asd、pVAXD-asd的菌落PCR鉴定结果 | 第59页 |
| ·真核表达载体质粒pVAX1-asd、pVAXD-asd的测序结果 | 第59-60页 |
| ·重组真核表达质粒pVAX1-asd-NSP4、pVAX1-asd-VP7、pVAXD-asd-NSP4-VP7的菌落PCR鉴定结果 | 第60-61页 |
| ·重组真核表达质粒pVAX1-asd-NSP4、pVAX1-asd-VP7、pVAXD-asd-NSP4-VP7的酶切鉴定结果 | 第61-63页 |
| 4 重组真核表达质粒电转化减毒沙门氏菌的鉴定结果 | 第63-66页 |
| ·重组真核表达质粒电转化减毒沙门氏菌的菌落PCR鉴定结果 | 第63-65页 |
| ·重组真核表达质粒电转化减毒沙门氏菌的酶切鉴定结果 | 第65-66页 |
| 5 重组沙门氏菌生物学特性试验结果 | 第66-69页 |
| ·重组真核表达质粒转染COS-7的间接免疫荧光试验结果 | 第66-68页 |
| ·重组菌χ4550(pVAXD-asd-NSP4-VP7)无抗生素条件下质粒稳定性试验 | 第68页 |
| ·重组沙门氏菌体内感染小鼠后RT-PCR检测VP7及NSP4基因的转录结果 | 第68-69页 |
| ·重组菌感染小鼠的安全性试验 | 第69页 |
| 6 重组沙门氏菌小鼠免疫试验结果 | 第69-75页 |
| ·ELISA检测小鼠血清样本IgG抗体水平结果 | 第69-71页 |
| ·ELISA检测小鼠肠道样本IgA抗体水平结果 | 第71-73页 |
| ·免疫小鼠γ-干扰素的检测结果 | 第73-75页 |
| 第四部分 讨论 | 第75-79页 |
| 1 VP7及NSP4基因克隆的分析 | 第75页 |
| 2 VP7和NSP4蛋白原核表达区域的选择 | 第75-76页 |
| 3 原核表达VP7及NSP4蛋白及制备抗体血清及对于后续试验的意义 | 第76页 |
| 4 真核表达载体的选择及改造 | 第76-77页 |
| 5 重组减毒沙门氏菌免疫的特点 | 第77页 |
| 6 NSP4基因对于增强机体体液和黏膜免疫应答作用探讨 | 第77-79页 |
| 第五部分 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-88页 |
