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大豆疫霉侵染大豆早期差异表达基因的筛选与功能分析

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-13页
引言第13-15页
上篇 文献综述第15-63页
 第一章 卵菌分子遗传学研究进展第15-42页
  第一节 卵菌生物学第15-16页
  第二节 卵菌基因组及功能基因组学第16-23页
   1.基因组大小第16-17页
   2.基因组组成第17页
   3.基因结构第17-19页
   4.疫霉菌基因组第19-20页
   5.基因组的不稳定性第20-21页
   6.疫霉菌功能基因组学第21-23页
  第三节 分子生物学技术平台第23-26页
   1.DNA转化技术第23-24页
   2.报告基因第24页
   3.基因沉默第24-25页
   4.遗传图谱第25-26页
  第四节 卵菌(疫霉菌)与植物互作的分子机制第26-31页
   1.疫霉菌致病性机制第26-30页
   ·游动孢子的产生、释放及萌发的细胞生物学和分子遗传学第26-28页
   ·疫霉菌在寄主组织上附着、穿透和定殖第28-29页
   ·抑制寄主防卫反应第29-30页
   2.植物防卫反应第30-31页
  参考文献第31-42页
 第二章 真菌在寄主组织定殖阶段相关基因研究进展第42-63页
  第一节 真菌在寄主组织上定殖时差异表达基因的发现第42-48页
   1.病原菌侵染早期:附着植物表面、孢子萌发及附着胞发育第43-44页
   2.活体营养阶段抵抗植物防卫反应第44-45页
   3.活体营养阶段从寄主中获取营养第45页
   4.死体营养和孢子形成阶段第45-48页
  第二节 互作过程中植物产生的信号及诱导基因的调节因子第48-50页
  第三节 致病性信号传导机制第50-54页
   1.G蛋白信号途径第50-51页
   2.cAMP信号途径第51-52页
   3.MAPK途径第52-54页
  参考文献第54-63页
下篇 研究内容第63-147页
 第一章 大豆疫霉侵染早期差异表达基因的筛选与分析第63-102页
  1.材料和方法第65-77页
   ·材料第66页
     ·供试菌株及大豆第66页
     ·供试药剂和培养基第66页
   ·方法第66-77页
     ·大豆疫霉的培养和接种方法第66页
     ·菌丝丛接种大豆叶片的形态学观察第66-67页
     ·菌丝RNA的提取方法(TRIzol法)第67页
     ·SSH过程第67-70页
     ·感受态大肠杆菌的制备及SSH-PCR产物的T/A克隆第70-71页
     ·质粒提取方法(碱裂解法)第71页
     ·文库质粒的点杂交方法第71-72页
     ·Virtual Northern杂交方法第72-74页
     ·阳性克隆的测序和序列分析方法第74页
     ·半定量RT-PCR分析方法第74-77页
  2.结果第77-93页
   ·接种大豆叶片的菌丝形态变化第77-78页
   ·抑制性差减文库的构建及阳性克隆的点杂交筛选第78-79页
   ·序列比对及生物信息学分析第79-90页
   ·virtual Northern分析第90-91页
   ·RT-PCR分析第91-93页
  3.讨论第93-96页
  参考文献第96-102页
 第二章 PsPHGPx抑制Bax诱导的酵母细胞凋亡及其表达调控研究第102-128页
  1.材料和方法第104-110页
   ·材料第104-105页
     ·供试菌株和植物材料第104页
     ·培养基第104-105页
     ·化学试剂第105页
   ·方法第105-110页
     ·大豆疫霉菌株Pmg2菌丝DNA和RNA的提取及cDNA的合成方法第105-106页
     ·大豆疫霉PsPHGPx基因和启动子部分序列的克隆及其生物信息学分析方法第106-107页
     ·Southern杂交分析方法第107页
     ·电转化方法第107-108页
     ·酵母实验方法第108-109页
     ·不同条件处理大豆疫霉菌丝的方法第109-110页
     ·不同条件处理大豆疫霉菌丝的RT-PCR分析方法第110页
  2.结果第110-121页
   ·PsPHGPx基因序列分析第110-113页
   ·大豆疫霉PHGPx的启动子含有压力反应元件和SRE元件第113页
   ·大豆疫霉PHGPx基因在基因组中的拷贝数第113-116页
   ·大豆疫霉PHGPx抑制Bax诱导的酵母细胞凋亡第116-117页
   ·大豆疫霉PsPHGPx的表达调控研究第117-121页
     ·逆境诱导大豆疫霉PsPHGPx的表达第117-118页
     ·钙信号途径参与了大豆疫霉PHGPx的诱导表达第118-119页
     ·PsPHGPx在大豆疫霉与大豆亲和互作中上调表达第119-121页
  3.讨论第121-123页
  参考文献第123-128页
 第三章 大豆疫霉一种新的激发子基因的克隆与功能分析第128-147页
  1.材料和方法第130-136页
   ·材料第130页
     ·供试菌株和植物材料第130页
     ·培养基第130页
   ·方法第130-136页
     ·大豆疫霉菌株Pmg2的DNA和RNA的提取方法第130页
     ·大豆疫霉PsDIP基因的克隆及序列分析方法第130-131页
     ·Southern杂交分析方法第131页
     ·PsDIP基因的RT-PCR分析方法第131页
     ·大肠杆菌JM109、BL21感受态细胞的制备第131页
     ·PVX::PsDIP及pET32b::PsDIP表达载体的构建第131-133页
     ·农杆菌感受态细胞的制备和转化方法第133页
     ·烟草及棉花坏死反应分析方法第133-134页
     ·烟草PR基因表达分析方法第134-135页
     ·PsDIP功能域分析方法第135-136页
  2.结果第136-143页
   ·大豆疫霉PsDIP基因序列分析第136-139页
   ·PsDIP基因的Southern杂交分析第139页
   ·PsDIP基因在亲和互作中下调表达第139-140页
   ·PsDIP引起烟草发生过敏性坏死反应第140-141页
     ·PVX::PsDIP引起烟草发生过敏性坏死反应第140页
     ·PsDIP原核表达蛋白引起烟草发生坏死反应第140-141页
   ·PsDIP原核表达蛋白注射烟草引起烟草PR基因的表达第141页
   ·PsDIP的功能域研究第141-143页
     ·PsDIP(N15-)引起烟草产生过敏反应第141页
     ·PsDIP(h-)不能使烟草产生过敏反应第141-143页
  3.讨论第143-144页
  参考文献第144-147页
附录第147-157页
 附录一:研究内容第三章构建的4个重组质粒的酶切验证第147-148页
 附录二:第四章 不同寄主来源寄生疫霉菌株的遗传变异分析第148-157页
博士期间发表的论文第157-158页
致谢第158页

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