| 目录 | 第1-5页 |
| 文献综述 | 第5-34页 |
| 引言 | 第6页 |
| 1. 大豆遗传转化技术 | 第6-21页 |
| ·应用于大豆遗传转化的两个主要再生体系 | 第6-8页 |
| ·根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的大豆遗传转化 | 第8-15页 |
| ·基因枪法(particle bombardment) | 第15-17页 |
| ·其它转化方法 | 第17页 |
| ·影响农杆菌介导大豆转化的一些主要因素 | 第17-21页 |
| 2. 无筛选标记转基因技术 | 第21-26页 |
| ·共转化法(co-transformation)去除筛选标记基因 | 第21-22页 |
| ·位点特异性重组系统的使用 | 第22-25页 |
| ·利用转座子系统去除筛选标记基因 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-34页 |
| 第一部分:根癌农杆菌介导的大豆胚尖高效遗传转化 | 第34-63页 |
| 前言 | 第35-37页 |
| 摘要 | 第37-39页 |
| 材料和方法 | 第39-45页 |
| 1. 植物材料 | 第39页 |
| 2. 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3. 培养基和试剂 | 第39-40页 |
| 4. 消毒方法 | 第40页 |
| 5. 外植体再生 | 第40-41页 |
| 6. 农杆菌的转化 | 第41页 |
| 7. 农杆菌介导大豆胚尖的遗传转化 | 第41-42页 |
| 8. 转基因大豆的鉴定 | 第42-45页 |
| ·GUS 染色分析 | 第42-43页 |
| ·大豆基因组的提取 | 第43页 |
| ·PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·Southern 印迹分析 | 第43-45页 |
| 结果和讨论 | 第45-63页 |
| 1. 大豆成熟种子高效的消毒方法 | 第45-48页 |
| 2. 大豆胚尖高效再生体系的建立 | 第48-53页 |
| ·大豆基因型的选择 | 第48-49页 |
| ·最佳BA 浓度和刺激时间的选择 | 第49-51页 |
| ·胚尖再生系统和其他两个常用器官再生体系的比较 | 第51-53页 |
| 3. 农杆菌介导大豆胚尖再生系统的高效遗传转化 | 第53-59页 |
| ·转化条件的优化 | 第53-56页 |
| ·转基因的植株再生成熟 | 第56-57页 |
| ·gus 基因的表达 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的分子鉴定 | 第58-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第二部分:热激控制转基因植物中阶段性外源基因的去除 | 第63-85页 |
| 前言 | 第64-66页 |
| 摘要 | 第66-68页 |
| 材料和方法 | 第68-77页 |
| 1. 植物材料 | 第68页 |
| 2. 菌株和质粒 | 第68页 |
| 3. 培养基 | 第68页 |
| 4. 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第68-70页 |
| 5. 大肠杆菌质粒大量提取 | 第70-71页 |
| 6. 农杆菌的转化 | 第71页 |
| 7. HSAE 载体的构建 | 第71-72页 |
| 8. 农杆菌介导法转化烟草及转基因植株的获得 | 第72-73页 |
| 9. 转基因烟草的热激反应 | 第73页 |
| 10. 提取烟草基因组总DNA | 第73页 |
| 11. PCR 分析检测 | 第73-74页 |
| 12. GUS 染色反应及GUS 酶活测定 | 第74页 |
| 13. Southern 鉴定 | 第74-77页 |
| 结果与讨论 | 第77-85页 |
| 1. HSAEA 载体的构建和转基因植株的获得 | 第77-79页 |
| 2. 热激前后的转基因植株GUS 染色反应和GUS 酶活测定 | 第79-81页 |
| 3. 热激前后的PCR 分析 | 第81页 |
| 4. 对nptⅡ和bar 基因的切除 | 第81-82页 |
| 5. 田间试验统计热激反应导致的切除 | 第82-85页 |
| 序列表 | 第85-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 发表文章目录 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录 1 质粒pCAMBIA2301 图谱 | 第96-97页 |
| 附录 2 质粒pZP212 图谱 | 第97-98页 |
| 附录 3 质粒pBI121 图谱 | 第98页 |
