| 第一章 文献综述 | 第1-50页 |
| ·前言 | 第18-19页 |
| ·造血功能药物 | 第19-20页 |
| ·干细胞因子的基因工程研究 | 第20-25页 |
| ·SCF基因及蛋白结构 | 第20-23页 |
| ·SCF的主要生理功能及临床应用 | 第23-24页 |
| ·SCF的基因克隆与表达研究 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌高密度发酵工艺 | 第25-28页 |
| ·发酵培养基组成 | 第26页 |
| ·碳源的优化 | 第26-27页 |
| ·发酵工艺的优化 | 第27页 |
| ·常用的发酵方式 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白复性的研究进展 | 第28-36页 |
| ·直接稀释法(包括透析法和超滤法) | 第29-30页 |
| ·液相色谱复性法(LC法) | 第30-33页 |
| ·人工配基辅助的蛋白复性 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白折叠中的二硫键 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白质的复性产率提高的策略 | 第35-36页 |
| ·重组干扰素-γ和重组干细胞因子研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-50页 |
| 第二章 重组人干扰素-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性 | 第50-59页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-52页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50-51页 |
| ·健康人外周血单核细胞的分离、刺激、培养 | 第51页 |
| ·提取总RNA | 第51页 |
| ·RT-PCR | 第51-52页 |
| ·重组hIFN-γ的表达和分离纯化 | 第52页 |
| ·病变抑制法测定hIFN-γ生物学活性 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-56页 |
| ·hIFN-γ全长cDNA和成熟肽基因的扩增、克隆与鉴定 | 第52-54页 |
| ·hIFN-γ在E.coli中的表达 | 第54-55页 |
| ·表达产物复性和同时纯化 | 第55页 |
| ·hIFN-γ生物学活性 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 第三章 hSCF基因的克隆、改造和原核表达工程菌的构建 | 第59-75页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·材料与方法 | 第60-64页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·DNA重组 | 第61页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制各和转化 | 第61-62页 |
| ·PCR | 第62-63页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第63页 |
| ·重组hSCF表达质粒的构建 | 第63页 |
| ·rhSCF在大肠杆菌中的诱导表达 | 第63页 |
| ·pBV220／hSCF质粒遗传稳定性的检测 | 第63-64页 |
| ·DHSα／pBV220／hSCF工程菌表达稳定性 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-70页 |
| ·hSCF全长和成熟肽cDNA基因的PCR、克隆 | 第64-65页 |
| ·hSCF cDNA鉴定 | 第65-67页 |
| ·rhSCF表达质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·hSCF在E.coli中的诱导表达 | 第68-69页 |
| ·工程菌质粒的遗传稳定性及表达稳定性的分析 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第四章 基因工程hSCF的批式补料发酵工艺的建立 | 第75-87页 |
| ·前言 | 第75-76页 |
| ·材料和方法 | 第76-78页 |
| ·质粒与菌株 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76-77页 |
| ·发酵培养基的筛选 | 第77页 |
| ·批式发酵 | 第77页 |
| ·5L发酵罐中补料批式发酵 | 第77-78页 |
| ·细胞干重的测定 | 第78页 |
| ·rhSCF表达量测定 | 第78页 |
| ·rhSCF的生物学活性测定 | 第78页 |
| ·实验结果 | 第78-83页 |
| ·发酵培养基 | 第78-79页 |
| ·碳源种类的选择 | 第79-80页 |
| ·发酵罐中重组菌的细胞生长曲线 | 第80页 |
| ·最佳诱导时间的选择 | 第80-81页 |
| ·批式发酵(batch)和补料批式发酵(fed-batch) | 第81-82页 |
| ·优化条件下重组菌的培养和rhSCF的表达 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第五章 rhSCF包含体分离、复性及离子交换色谱纯化 | 第87-98页 |
| ·前言 | 第87页 |
| ·材料 | 第87-90页 |
| ·仪器 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·rhSCF包含体洗涤所用缓冲液 | 第88页 |
| ·rhSCF变性抽提液的制备 | 第88-89页 |
| ·包涵体蛋白含量测定 | 第89页 |
| ·rhSCF体外复性 | 第89页 |
| ·稀释法复性的IEC法 | 第89-90页 |
| ·rhSCF的生物学活性测定方法的建立 | 第90页 |
| ·实验结果 | 第90-94页 |
| ·包含体的清洗 | 第90-91页 |
| ·rhSCF包涵体的体外复性缓冲液的优化 | 第91-93页 |
| ·弱阴离子交换色谱(WAX)法分离纯化复性rhSCF | 第93-94页 |
| ·rhSCF产物的分析 | 第94页 |
| ·讨论 | 第94-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 第六章 USRPP分离性能及其复性并同时纯化rhSCF | 第98-110页 |
| ·前言 | 第98页 |
| ·HPHIC复性与同时纯化的蛋白机理进展 | 第98-100页 |
| ·USRPP-HPHIC复性及同时纯化重组蛋白的策略 | 第100-102页 |
| ·流动相与固定相的选择 | 第100-101页 |
| ·目标蛋白峰的确定 | 第101页 |
| ·进样方式与进样量的选择 | 第101页 |
| ·提高蛋白在USRPP上的复性效率 | 第101-102页 |
| ·USRPP-HPHIC的分离能力 | 第102-103页 |
| ·材料与试剂 | 第102页 |
| ·色谱柱与USRPP性能比较 | 第102-103页 |
| ·HPHIC复性和同时纯化rhSCF包涵体 | 第103页 |
| ·蛋白含量和生物学活性的测定 | 第103页 |
| ·实验结果 | 第103-105页 |
| ·HPHIC柱和饼的分离性能 | 第103-104页 |
| ·不同规格的USRPP对rhSCF进行复性及同时纯化比较 | 第104-105页 |
| ·生物学活性及比活性分析 | 第105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 第七章 用HPHIC复性并同时纯化rhSCF条件的优化 | 第110-127页 |
| ·前言 | 第110-111页 |
| ·材料与试剂 | 第111-112页 |
| ·rhSCF的稀释复性 | 第111页 |
| ·HPHIC色谱饼复性和同时纯化rhSCF | 第111页 |
| ·透析除去盐分与冻干 | 第111-112页 |
| ·半成品与冻干粉剂的检定 | 第112页 |
| ·理化性质分析 | 第112页 |
| ·实验结果 | 第112-121页 |
| ·影响HPHIC上复性及同时纯化rhSCF的因素 | 第112-117页 |
| ·色谱条件的优化 | 第117-119页 |
| ·活性回收率 | 第119页 |
| ·半成品与冻干粉的一些性能比较 | 第119-121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| 结论 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第八章 脲梯度浓度SEC复性与同时纯化rhSCF | 第127-135页 |
| ·前言 | 第127-128页 |
| ·材料和方法 | 第128-129页 |
| ·材料 | 第128页 |
| ·仪器 | 第128页 |
| ·体积排阻色谱 | 第128-129页 |
| ·普通SEC复性rhSCF | 第128页 |
| ·脲浓度梯度SEC复性rhSCF | 第128-129页 |
| ·实验结果 | 第129-132页 |
| ·脲浓度梯度复性rhSCF | 第129页 |
| ·洗脱长度的确定 | 第129-130页 |
| ·脲梯度中洗脱剂的流速对复性影响 | 第130页 |
| ·包含体抽提液的浓度对rhSCF复性影响 | 第130页 |
| ·普通SEC与脲浓度梯度SEC复性rhSCF | 第130-132页 |
| ·讨论 | 第132页 |
| 结论 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-135页 |
| 第九章 微囊稀释法对rhSCF复性 | 第135-145页 |
| ·前言 | 第135-136页 |
| ·材料与方法 | 第136-137页 |
| ·实验材料 | 第136页 |
| ·稀释法复性 | 第136页 |
| ·微囊缓释法复性rhSCF | 第136-137页 |
| ·rhSCF生物学活性 | 第137页 |
| ·蛋白含量测定 | 第137页 |
| ·纯度分析 | 第137页 |
| ·分子量测定 | 第137页 |
| ·实验结果 | 第137-141页 |
| ·包含体的溶解、纯化 | 第137-138页 |
| ·缓释微囊促进rhSCF的复性 | 第138-139页 |
| ·rhSCF生物学活性 | 第139页 |
| ·理化性质的分析 | 第139-141页 |
| ·讨论 | 第141-142页 |
| 结论 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-145页 |
| 在读学位期间发表论文 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
