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四川省松树散斑壳菌的种类及其rRNA基因ITS区的PCR、克隆和序列分析

摘要第1-8页
前言第8-15页
 1 文献综述第8-15页
   ·散斑壳属真菌的分类研究概况第8-11页
     ·散斑壳的传统分类学第8-9页
     ·生物学技术在分类研究中的应用第9-11页
   ·散斑壳属真菌的致病性第11页
   ·散斑壳菌的生活史第11-12页
   ·散斑壳真菌的分离培养第12页
   ·核酸序列分析在真菌系统学中的应用第12-15页
     ·核酸序列分析的研究进展第12-13页
     ·rRNA基因ITS区序列分析在真菌系统学中的应用第13-15页
第一部分 散斑壳属不同种的形态学鉴定第15-22页
 1 材料和方法第15-16页
   ·散斑壳属种的形态特征分类及鉴定第15页
     ·样品的采集第15页
     ·形态特征分类第15页
   ·散斑壳属的生物学特性第15-16页
     ·病原菌的分离和培养第15页
       ·子囊果组织分离法第15页
       ·子囊果研磨法第15页
       ·子囊孢子分离法第15页
     ·病原菌产孢特性的研究第15-16页
       ·诱发子囊果的产生第15-16页
       ·子囊孢子的释放与萌发第16页
 2 结果与分析第16-20页
   ·四川省散斑壳病菌Lophodermium种的鉴定第16-18页
   ·散斑壳菌的产孢特性第18-20页
     ·诱发子实体的产生第18页
     ·子囊孢子的释放和萌发第18-20页
 3 讨论第20-22页
   ·四川省散斑壳病菌Lophodermium种的鉴定第20-21页
   ·散斑壳菌的产孢特性第21-22页
第二部分 散斑壳属若干种rRNA基因ITS区的PCR、克隆和序列分析第22-37页
 1 试验材料及仪器第22-23页
   ·试验菌株第22页
   ·药品和试剂第22-23页
     ·常规药品和化学试剂第22页
     ·培养基第22-23页
     ·分子生物学试剂第23页
   ·主要设备仪器第23页
 2 试验方法第23-27页
   ·散斑壳真菌细胞总DNA的提取第23-24页
     ·不同种散斑壳菌丝体的获得第23页
     ·不同方法提取散斑壳真菌细胞总DNA第23-24页
       ·氯化苄法第23页
       ·改良二次沉淀法第23-24页
   ·散斑壳属不同种rRNA基因ITS区的PCR扩增第24-25页
     ·扩增引物第24页
     ·PCR扩增反应体系第24页
     ·PCR扩增反应循环第24-25页
     ·PCR产物电泳检测第25页
   ·不同种散斑壳rRNA基因ITS区的PCR扩增片段的克隆第25-27页
     ·PCR扩增DNA片段的纯化和回收第25页
     ·JM109载体菌感受态细胞的制备第25页
     ·回收的DNA片段与pUCm-T载体的连接第25-26页
     ·重组质粒转入JM109感受态细胞第26页
     ·阳性克隆菌株的筛选和鉴定第26-27页
       ·阳性克隆菌株的筛选第26页
       ·阳性克隆菌株的酶切鉴定第26-27页
   ·克隆片段的DNA序列测定及分析第27页
     ·DNA序列的测定第27页
     ·DNA序列的分析第27页
 3 结果与分析第27-34页
   ·散斑壳真菌细胞总DNA的提取第27-28页
   ·散斑壳属不同种rRNA基因ITS区的PCR扩增第28页
   ·阳性克隆菌株的酶切鉴定第28-29页
   ·散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS区序列第29-33页
   ·散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS序列的系统发育分析第33-34页
 4 讨论第34-37页
   ·散斑壳真菌细胞总DNA的提取第34页
   ·散斑壳属不同种rRNA基因ITS区的PCR扩增第34-35页
   ·散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS序列的系统发育分析第35-37页
结论第37-38页
参考文献第38-43页
英文摘要第43-45页
致谢第45-46页
附录第46-49页

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