| 摘要 | 第1-10页 |
| 1 引言 | 第10-41页 |
| ·泡沫病毒基因表达研究进展 | 第10-30页 |
| ·泡沫病毒具有独特的生活周期 | 第10-17页 |
| ·泡沫病毒的结构特点 | 第12-13页 |
| ·泡沫病毒的复制特点 | 第13-17页 |
| ·泡沫病毒的基因表达与转录调控 | 第17-30页 |
| ·泡沫病毒的启动子 | 第17-20页 |
| ·泡沫病毒的调控蛋白 | 第20-26页 |
| ·泡沫病毒的转录本 | 第26-28页 |
| ·泡沫病毒转录调控模式 | 第28-30页 |
| ·病毒与细胞组蛋白乙酰化酶 | 第30-37页 |
| ·组蛋白乙酰化酶与基因转录调控 | 第30-32页 |
| ·病毒与组蛋白乙酰化酶系统 | 第32-37页 |
| ·HIV-1反式激活因子Tat与乙酰化 | 第32-34页 |
| ·腺病毒转录激活因子E1A与乙酰化 | 第34-35页 |
| ·其它病毒蛋白与细胞乙酰化通路 | 第35-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-41页 |
| ·本研究的前期基础 | 第37-39页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第39-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-56页 |
| ·实验材料 | 第41-43页 |
| ·病毒 | 第41页 |
| ·细胞 | 第41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41-43页 |
| ·本文构建的质粒 | 第41-42页 |
| ·本文用到的其它质粒 | 第42-43页 |
| ·探针 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-56页 |
| ·细胞与病毒的培养 | 第43-44页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第44页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第44-45页 |
| ·引物设计及合成 | 第44-45页 |
| ·扩增反应 | 第45页 |
| ·质粒构建 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA提取 | 第45页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第45页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备和转化 | 第45-46页 |
| ·报道基因的瞬时表达分析 | 第46-48页 |
| ·细胞转染 | 第46页 |
| ·荧光素酶活性测定(Luc Assay) | 第46-47页 |
| ·内对照系统 | 第47-48页 |
| ·序列分析 | 第48页 |
| ·RT-PCR | 第48-49页 |
| ·Sourthern Blot | 第49页 |
| ·电泳 | 第49页 |
| ·转膜 | 第49页 |
| ·杂交 | 第49页 |
| ·显色 | 第49页 |
| ·Western Blot | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第50页 |
| ·转膜 | 第50页 |
| ·杂交 | 第50页 |
| ·Northern-Blot | 第50-51页 |
| ·甲醛凝胶RNA电泳 | 第50-51页 |
| ·转膜 | 第51页 |
| ·探针的标记 | 第51页 |
| ·杂交 | 第51页 |
| ·5′cDNA末端快速扩增分析 | 第51页 |
| ·重组蛋白质表达 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| ·亲和纯化 | 第52页 |
| ·离子交换纯化 | 第52-53页 |
| ·分子排阻纯化 | 第53页 |
| ·蛋白质的浓缩 | 第53页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第53-54页 |
| ·抗血清制备及效价测定 | 第54页 |
| ·小鼠免疫 | 第54页 |
| ·ELISA测定效价 | 第54页 |
| ·直接或间接荧光分析 | 第54页 |
| ·制备细胞片 | 第54页 |
| ·免疫荧光染色 | 第54页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第54-56页 |
| ·细胞转染 | 第55页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-112页 |
| ·Borf1生物信息学分析 | 第56-62页 |
| ·Borf1分子进化分析 | 第56-57页 |
| ·Borf1同源性比较 | 第56页 |
| ·Borf1分子进化分析 | 第56-57页 |
| ·Borf1基本性质的信息学预测 | 第57-58页 |
| ·Borf1结构域预测 | 第58页 |
| ·Borf1翻译后修饰预测 | 第58-62页 |
| ·磷酸化修饰预测 | 第58-61页 |
| ·SUMO修饰预测 | 第61-62页 |
| ·BFV3026不同感染时间borf1转录拼接方式各异 | 第62-76页 |
| ·BFV3026非结构基因转录本检测 | 第62-64页 |
| ·起始borf1转录的启动子及borf1转录本分析 | 第64-71页 |
| ·Borf1转录本检测 | 第64-67页 |
| ·Borf1转录本5′-RACE分析 | 第67-71页 |
| ·BFV感染细胞borf1特异性转录本的动力学变化 | 第71-76页 |
| ·Borf1细胞内定位 | 第76-98页 |
| ·Borf1可溶性表达与纯化 | 第76-81页 |
| ·Borf1原核表达质粒的构建 | 第76页 |
| ·Borf1可溶性表达 | 第76页 |
| ·亲和纯化 | 第76-78页 |
| ·离子交换纯化 | 第78-80页 |
| ·分子排阻纯化 | 第80-81页 |
| ·Borf1晶体生长条件的摸索 | 第81页 |
| ·抗体制备 | 第81-85页 |
| ·抗血清制备及效价测定 | 第81-84页 |
| ·抗血清应用 | 第84-85页 |
| ·Borf1细胞内定位及定位相关序列的确定 | 第85-98页 |
| ·Borf1细胞内定位 | 第85-89页 |
| ·入核机制的分析 | 第89-93页 |
| ·入核相关序列的确定 | 第93-98页 |
| ·Borf1激活机制的探讨 | 第98-112页 |
| ·Borf1在多种细胞中可行使激活功能 | 第98-99页 |
| ·Borf1激活域的确定 | 第99-106页 |
| ·pBD-Borf1野生型及系列缺失质粒的构建 | 第99-104页 |
| ·pBD-Borf1融合质粒激活活性分析 | 第104-106页 |
| ·Borf1激活作用与组蛋白乙酰化相关 | 第106-112页 |
| ·CBP、P300和HDAC1与Borf1的转录激活活性 | 第106-109页 |
| ·p300与Borf1的相互作用 | 第109-110页 |
| ·p300与Borf1共定位 | 第110-112页 |
| 4 讨论 | 第112-120页 |
| ·泡沫病毒反式激活因子Tas具有进化相对独立性 | 第112-113页 |
| ·FV利用不同的启动子实现转录调控，并可能利用RNA的转录后加工实现转录后调控 | 第113-117页 |
| ·BFV3026 borf1转录起始的独特性及其与基因调控的关系 | 第113-115页 |
| ·BFV3026可能利用RNA的转录后加工实现转录后调控 | 第115-117页 |
| ·Borf-1蛋白的结构域与其它种属泡沫病毒Tas不尽相同 | 第117-118页 |
| ·Borf1反式激活功能的作用机制 | 第118-120页 |
| 结论 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-128页 |
| 附录 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
