| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 材料与方法 | 第13-47页 |
| 1.实验材料 | 第13-20页 |
| 2.实验方法 | 第20-47页 |
| ·RT-PCR方法克隆特异的cDNA片段 | 第20-23页 |
| ·质粒载体的构建 | 第23-26页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第26-30页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第30-32页 |
| ·睾丸组织抽提液的制备 | 第32-33页 |
| ·Western Blot分析 | 第33-35页 |
| ·免疫组织化学方法 | 第35-36页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库滴度的测定与扩增 | 第36页 |
| ·酵母转化 | 第36-40页 |
| ·β半乳糖苷酶活性的检测 | 第40-42页 |
| ·阳性克隆插入片段的PCR扩增及鉴定 | 第42页 |
| ·细胞的复苏、传代、冻存 | 第42-43页 |
| ·真核细胞的转染 | 第43-44页 |
| ·荧光蛋白与细胞化学荧光的共定位 | 第44-45页 |
| ·GST-VCY与His_6-tagged-PO的体外结合实验 | 第45-47页 |
| 实验结果 | 第47-81页 |
| 1.VCY全长cDNA的克隆 | 第47-50页 |
| ·人睾丸组织总RNA的提取 | 第47页 |
| ·RT-PCR扩增VCX/Y cDNAs | 第47-49页 |
| ·VCY cDNA的克隆及测序 | 第49-50页 |
| 2.VCY蛋白的表达与纯化 | 第50-55页 |
| ·pGEX-4T-3-VCY重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的表达及沉积定位 | 第51-53页 |
| ·GST-VCY融合蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| 3.抗VCY多克隆抗体的制备 | 第55-56页 |
| ·纯化蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第55页 |
| ·Western blot检测抗体特异性 | 第55-56页 |
| 4.VCX／Y家族蛋白在人睾丸组织中的定位 | 第56页 |
| 5.VCY和VCX-8r在真核细胞中的表达定位 | 第56-62页 |
| ·pEGFP-N1-VCY和pEGFP-N1-VCX-8r荧光表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·VCY-GFP和VCX-8r-GFP蛋白在COS7细胞中的定位 | 第59页 |
| ·VCY-RFP和VCX-8r-GFP蛋白在COS7细胞中的共定位 | 第59-62页 |
| 6.VCY系列缺失突变体在COS7细胞中的定位研究 | 第62-67页 |
| ·双重核定位信号的验证 | 第62-65页 |
| ·核仁定位区的确定 | 第65-67页 |
| 7.酵母双杂交筛选与VCX/Y相互作用的蛋白质分子 | 第67-73页 |
| ·人睾丸pACT2文库的扩增 | 第67页 |
| ·“诱饵”质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·酵母宿主菌Y190的表型验证及“诱饵”蛋白自激活检测 | 第68-69页 |
| ·文库的筛选 | 第69-70页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第70-73页 |
| 8.酸性核糖体蛋白PO cDNA编码区全长的克隆 | 第73-75页 |
| 9.PO蛋白的原核表达及纯化 | 第75-77页 |
| ·PO原核蛋白表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·PO蛋白的表达及其在大肠杆菌中的沉积定位 | 第76-77页 |
| ·重组PO蛋白的纯化 | 第77页 |
| 10.PO和VCY蛋白的体外结合验证 | 第77-79页 |
| 11.PO和VCY蛋白在真核细胞中的共定位 | 第79-81页 |
| ·荧光表达载体的构建 | 第79页 |
| ·PO和VCY蛋白在COS7细胞中的共定位 | 第79-81页 |
| 讨论 | 第81-90页 |
| 1.VCY基因的原核表达 | 第81-82页 |
| 2.VCX/Y蛋白在睾丸组织中的定位 | 第82-83页 |
| 3.VCX/Y基因在真核细胞中的表达定位研究 | 第83-88页 |
| ·激光共聚焦显微技术 | 第83-84页 |
| ·有关绿色荧光蛋白(GFP)的理论和技术背景 | 第84-85页 |
| ·VCY和VCX-8r蛋白在COS7细胞中的荧光定位 | 第85-87页 |
| ·VCY和VCX-8r蛋白在COS7细胞中的共定位研究 | 第87页 |
| ·VCX/Y家族蛋白质双重核定位信号的验证 | 第87-88页 |
| ·VCX/Y家族蛋白核仁定位区的确定 | 第88页 |
| 4.与VCX/Y蛋白相互作用的蛋白分子 | 第88-90页 |
| 总结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 文献综述 | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
