| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一部分 引言与文献综述 | 第11-38页 |
| 1 我国干旱概况 | 第11页 |
| 2 干旱对植物的影响 | 第11-12页 |
| 3 植物的抗旱性 | 第12页 |
| 4 植物抗旱的形态结构和生物学原理 | 第12-19页 |
| ·植物抗旱的形态结构特点 | 第12-14页 |
| ·植物抗旱的生物学原理 | 第14-19页 |
| ·渗透调节 | 第14-15页 |
| ·Lea蛋白保护 | 第15-16页 |
| ·可溶性糖保护 | 第16页 |
| ·水通道蛋白、脱水素 | 第16-17页 |
| ·光合作用调节 | 第17页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第17-18页 |
| ·气孔行为 | 第18-19页 |
| 5 植物抗旱相关基因研究进展 | 第19-24页 |
| ·脯氨酸(Proline)生物合成的相关基因 | 第19-20页 |
| ·甘露醇(mannitol)合成的相关基因 | 第20页 |
| ·甜菜碱(Glycinebetaine)生物合成的相关基因 | 第20页 |
| ·海藻糖(Trehalose)生物合成的相关基因 | 第20-21页 |
| ·果聚糖(Fructan)生物合成相关的基因 | 第21页 |
| ·肌醇甲酯(D-ononitol)生物合成相关基因 | 第21-22页 |
| ·多胺(Polyamine)生物合成相关基因 | 第22页 |
| ·胚胎后期发生丰富蛋白基因(Lea)或Lea相关基因 | 第22-23页 |
| ·编码转录因子的调节基因 | 第23页 |
| ·解毒酶和氧化胁迫相关酶基因 | 第23-24页 |
| 6 海藻糖的特性 | 第24-32页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第24-26页 |
| ·海藻糖的来源 | 第26页 |
| ·干燥胁迫下生物体细胞内海藻糖含量的变化 | 第26页 |
| ·海藻糖对生物的保护作用 | 第26-30页 |
| ·海藻糖对高等动植物细胞的保护作用 | 第27-28页 |
| ·海藻糖对生物膜系的保护作用 | 第28页 |
| ·海藻糖对DNA辐射损伤的保护作用 | 第28-29页 |
| ·海藻糖对蛋白质的稳定作用 | 第29页 |
| ·海澡糖对其它生物分子的保护 | 第29-30页 |
| ·海藻糖的抗逆分子机理 | 第30-31页 |
| ·“水替代”学说 | 第30-31页 |
| ·“玻璃态”学说 | 第31页 |
| ·海藻糖的应用前景 | 第31-32页 |
| 7 海藻糖的生物合成 | 第32-34页 |
| ·通过磷酸化酶合成海藻糖 | 第32-33页 |
| ·通过海藻糖-6-磷酸合酶和6-磷酸磷酸酯酶合成海藻糖 | 第32-33页 |
| ·通过海藻糖磷酸化酶合成海藻糖 | 第33页 |
| ·通过海藻糖合酶合成海藻糖 | 第33-34页 |
| ·以葡萄糖为底物合成海藻糖 | 第33-34页 |
| ·以麦芽糖为底物合成海藻糖 | 第34页 |
| ·通过糖基转移酶和淀粉酶合成海藻糖 | 第34页 |
| ·通过麦芽寡糖基海藻糖合酶和海藻糖水解酶合成海藻糖 | 第34页 |
| 8 海藻糖合酶基因遗传转化的研究进展 | 第34-36页 |
| 9 本研究的目的意义及内容 | 第36-37页 |
| 10 实验技术路线 | 第37-38页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第38-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第38页 |
| ·质粒及菌种 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| 2 pBBBT植物表达载体的构建 | 第38-45页 |
| ·质粒载体的大量提取及纯化 | 第38-40页 |
| ·pGC29质粒的大量提取与纯化 | 第38-40页 |
| ·pBBB-ETR质粒的大量提取与纯化 | 第40页 |
| ·质粒载体的酶切及目的片段的回收 | 第40-45页 |
| ·酶切 | 第40-42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42-43页 |
| ·目的回收片段的连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·重组质粒DNA的小量制备 | 第44-45页 |
| ·电泳分析 | 第45页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组菌的保存 | 第45页 |
| 3 植物表达载体转化农杆菌 | 第45-50页 |
| ·转化方法 | 第46页 |
| ·转化农杆菌的点杂交鉴定 | 第46-50页 |
| ·探针制备 | 第46-47页 |
| ·海藻糖合酶基因片段的获得 | 第46页 |
| ·目的片段的回收 | 第46-47页 |
| ·探针制备 | 第47页 |
| ·农杆菌质粒提取 | 第47-48页 |
| ·DNA的固定 | 第48页 |
| ·预杂交与杂交 | 第48-49页 |
| ·洗膜与显色 | 第49-50页 |
| ·重组农杆菌的保存 | 第50页 |
| 4 海藻糖合酶基因遗传转化烟草 | 第50-57页 |
| ·烟草转化材料的准备 | 第50页 |
| ·烟草培养基成分 | 第50页 |
| ·烟草无菌外植体的获得 | 第50页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第50-57页 |
| ·农杆菌菌液的准备 | 第50-51页 |
| ·转化材料的预培养 | 第51页 |
| ·叶盘法转化 | 第51页 |
| ·转化植株的检测 | 第51-57页 |
| ·PPT体外初步筛选转化植株 | 第51页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第51-52页 |
| ·PCR检测 | 第52-53页 |
| ·转化植株的Southern杂交 | 第53-56页 |
| ·阳性植株总DNA的大量提取 | 第53-54页 |
| ·测定总DNA的浓度与纯度检测 | 第54页 |
| ·植物总DNA的酶切反应 | 第54-55页 |
| ·酶切效果检验 | 第55页 |
| ·电泳 | 第55页 |
| ·Southern印迹转移、杂交 | 第55-56页 |
| ·转基因植株的形态观察及抗旱性鉴定 | 第56页 |
| ·转基因植株的海藻糖测定 | 第56-57页 |
| ·海藻糖的提取 | 第56页 |
| ·海藻糖HPLC／ELSD测定 | 第56-57页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第57-66页 |
| 1 植物表达载体的构建 | 第57-59页 |
| 2 植物表达载体导入农杆菌 | 第59页 |
| 3 农杆菌介导的烟草转化结果 | 第59-60页 |
| 4 PPT体外初步筛选转化植株 | 第60-61页 |
| 5 转化植株的PCR检测 | 第61页 |
| 6 转化植株的Southern Blotting检测 | 第61-62页 |
| 7 转基因植株的形态观察 | 第62-63页 |
| 8 转基因植株的海藻糖HPLC／ELSD测定 | 第63-65页 |
| 9 转基因植株的抗旱性试验 | 第65-66页 |
| 第四部分 结论 | 第66-67页 |
| 第五部分 讨论 | 第67-71页 |
| 1 关于双拷贝启动子 | 第67页 |
| 2 关于海藻糖合酶基因 | 第67-68页 |
| 3 关于PPT体外抗性筛选 | 第68页 |
| 4 转基因植株海藻糖积累与形态改变及抗性增强 | 第68-69页 |
| 5 关于新抗旱基因的发现及克隆 | 第69-70页 |
| 6 关于本实验的后续工作 | 第70-71页 |
| 参考文献: | 第71-81页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
