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利用Cre/loxP重组激活系统对耐盐基因和启动子的功能分析

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
第1章 绪论第11-18页
   ·Na~+/H~+逆向转运蛋白第11-13页
   ·Hsp18.2 与 rd29A 启动子第13-14页
   ·Cre/loxP 特异位点重组系统第14-17页
     ·Cre/loxP 特异位点重组系统在基因切除上的应用第14-15页
     ·Cre/loxP 特异位点重组系统在基因定点整合上的应用第15-17页
   ·本研究的目的和意义第17-18页
第2章 AtNHX1、TvNHX1 植物表达载体的构建与鉴定第18-29页
   ·试验和材料第18-19页
     ·质粒和菌种第18页
     ·酶和主要试剂第18页
     ·培养基第18页
     ·质粒提取试剂第18页
     ·引物第18-19页
     ·主要仪器设备第19页
   ·试验方法第19-21页
     ·质粒 DNA 的提取第19页
     ·目的片段及载体的酶切、胶回收与连接第19-20页
     ·连接产物的转化、筛选和鉴定第20-21页
     ·农杆菌感受态细胞制备第21页
     ·电击法转化农杆菌感受态细胞第21页
   ·结果与分析第21-26页
     ·中间载体 pBnUAS-TvNHX1-T_n 的构建与鉴定第21-23页
     ·植物表达载体 pGII227-UASTvNHX1T_n-rd29ACREN 构建与鉴定第23-24页
     ·植物表达载体 pGII227-UASAtNHX1T_n-rd29ACREN 构建与鉴定第24-25页
     ·植物表达载体转化农杆菌及鉴定第25-26页
   ·讨论第26-28页
     ·植物表达载体的特点第26-27页
     ·助质粒 pSoup 的作用第27页
     ·电击法转化策略第27-28页
   ·本章小结第28-29页
第3章 农杆菌介导的共转化和转基因植株的筛选与鉴定第29-38页
   ·试验材料第29-30页
     ·植物材料第29页
     ·质粒和菌种第29页
     ·酶和主要试剂第29-30页
     ·引物第30页
     ·主要仪器设备第30页
   ·试验方法第30-32页
     ·基质培养法栽培拟南芥第30页
     ·农杆菌介导的共转化第30-31页
     ·转基因拟南芥植株的抗性筛选第31页
     ·转基因植株基因组 DNA 的提取第31-32页
     ·转基因植株的 PCR 检测第32页
   ·结果与分析第32-35页
     ·基质中拟南芥的生长及共转化后的状态第32页
     ·转基因植株的抗性筛选第32-33页
     ·转基因植株的 PCR 检测第33-35页
   ·讨论第35-36页
     ·拟南芥转化第35-36页
     ·抗性筛选第36页
   ·本章小结第36-38页
第4章 耐盐基因和启动子的功能分析第38-60页
   ·试验材料第39-40页
     ·植物材料第39页
     ·酶和主要试剂第39-40页
     ·引物第40页
     ·主要仪器设备第40页
   ·试验方法第40-43页
     ·转基因拟南芥植株的盐胁迫处理第40-41页
     ·盐胁迫植株主根长的测量及表型观察第41页
     ·叶绿素含量的测定第41页
     ·激光共聚焦显微镜下 GFP 的观察第41页
     ·Cre 重组酶介导 loxP 位点删除反应的 PCR 检测第41-42页
     ·RNA 的制备第42页
     ·cDNA 第一链的合成(反转录)第42-43页
     ·cDNA 的 PCR 反应第43页
     ·数据统计分析第43页
   ·结果与分析第43-56页
     ·盐处理植株的主根长第43-45页
     ·盐胁迫对不同转基因植株表型的影响第45-47页
     ·盐胁迫对叶绿素含量的影响第47页
     ·Cre 重组酶介导 loxP 位点删除反应的检验第47-48页
     ·激光共聚焦显微镜观察 GFP第48-51页
     ·总 RNA 提取及半定量 RT-PCR 反应条件的优化第51-52页
     ·盐胁迫下转基因植株目的基因与报告基因的表达分析第52-56页
   ·讨论第56-58页
     ·激光共聚焦显微镜观察 GFP第56页
     ·半定量 RT-PCR 中 GFP 与 NHX1 的表达第56-58页
     ·TvNHX1 和 AtNHX1 的耐盐性分析第58页
   ·本章小结第58-60页
结论第60-61页
参考文献第61-70页
攻读硕士学位期间发表的学术论第70-71页
致谢第71页

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