| 第一章 引言 | 第1-30页 |
| 1 褐藻胶多糖和低聚糖的生物学活性的研究 | 第14-17页 |
| ·褐藻胶多糖及生物活性物质的研究 | 第14-16页 |
| ·褐藻的基本结构 | 第14页 |
| ·褐藻胶的生物来源与结构特点 | 第14-15页 |
| ·褐藻胶多糖生物活性物质的开发 | 第15-16页 |
| ·褐藻胶低聚糖及其生物学活性的研究 | 第16-17页 |
| ·褐藻胶低聚糖 | 第16-17页 |
| ·褐藻胶低聚糖的生物学活性 | 第17页 |
| 2 褐藻胶裂解酶及其分子生物学研究 | 第17-21页 |
| ·褐藻胶裂解酶 | 第17-19页 |
| ·褐藻胶裂解酶的来源 | 第17-18页 |
| ·褐藻胶裂解酶的作用机制 | 第18页 |
| ·褐藻胶裂解酶的底物特异性与分类 | 第18-19页 |
| ·褐藻胶裂解酶的酶活测定方法 | 第19页 |
| ·褐藻胶裂解酶基因的克隆与功能鉴定研究 | 第19-21页 |
| ·褐藻胶裂解酶的构-效关系研究 | 第21页 |
| 3 褐藻胶的微生物合成及其分子生物学研究 | 第21-27页 |
| ·细菌合成褐藻胶的遗传学基础 | 第21-24页 |
| ·细菌中褐藻胶的生物合成途径 | 第24-27页 |
| ·细菌中褐藻胶生物合成的调控机制 | 第24-25页 |
| ·褐藻胶的别构修饰 | 第25-27页 |
| 4 褐藻胶的生物转化 | 第27-30页 |
| ·酶法制备褐藻胶低聚糖的研究 | 第27-28页 |
| ·微生物生物合成与修饰的研究 | 第28-30页 |
| 第二章 褐藻胶裂解酶新基因克隆、序列分析和重组酶的表达、纯化与性质的初步研究 | 第30-61页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-41页 |
| ·海水环境基因组DNA质粒文库的构建 | 第31-34页 |
| ·SDS-CTAB法制备海水总基因组DNA | 第31-32页 |
| ·总基因组DNA的条件酶切 | 第32页 |
| ·质粒pBluescript Ⅱ KS(+)的去磷酸化处理 | 第32-33页 |
| ·质粒文库的构建和保存 | 第33-34页 |
| ·褐藻胶裂解酶新基因的筛选 | 第34-35页 |
| ·褐藻胶裂解酶的生物信息学分析与和简并PCR引物的设计 | 第34页 |
| ·algL基因的96孔板法PCR筛选 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆D45中外源基因片段的序列分析 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆D45的培养 | 第35页 |
| ·pD45质粒的酶切鉴定与序列测定 | 第35页 |
| ·外源基因的序列分析 | 第35-36页 |
| ·algL基因的重组、表达和纯化 | 第36-38页 |
| ·表达型重组质粒pLyaseA的构建 | 第36-37页 |
| ·重组褐藻胶裂解酶AlgL的表达条件优化 | 第37页 |
| ·重组褐藻胶裂解酶的大量表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·重组褐藻胶裂解酶的初步鉴定 | 第38-41页 |
| ·蛋白质浓度的Lowry法法测定 | 第38-39页 |
| ·糖醛酸浓度的Carbazole法测定 | 第39页 |
| ·酶活的紫外吸收法测定 | 第39-40页 |
| ·酶底物专一性的PAGE分析 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-55页 |
| ·褐藻胶裂解酶基因的生物信息学分析与简并PCR引物 | 第41-43页 |
| ·海水环境基因组DNA基因文库的构建和96孔板法筛选 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pD45的酶切鉴定与序列分析 | 第44-45页 |
| ·algL基因和AlgL蛋白的序列分析 | 第45-48页 |
| ·pLyase-A重组菌诱导表达条件的优化 | 第48-50页 |
| ·含His-标签AlgL的大量表达和纯化 | 第50-51页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第51-52页 |
| ·已糖醛酸浓度的测定 | 第52-53页 |
| ·AlgL活性的紫外吸收法测定 | 第53页 |
| ·AlgL底物特性的PAGE电泳分析 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-61页 |
| ·实验的技术路线 | 第55-56页 |
| ·海水环境基因组DNA文库的构建 | 第56-57页 |
| ·algL基因的筛选 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆D45外源基因的分析 | 第58-59页 |
| ·重组AlgL的表达与纯化 | 第59页 |
| ·重组AlgL的性质分析 | 第59-61页 |
| 第三章 海洋假单胞细菌的筛选、16S rRNA鉴定和褐藻胶操纵元全基因序列的克隆以及生物信息学分析 | 第61-74页 |
| 1 实验材料 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-66页 |
| ·algL基因来源菌株的筛选和鉴定 | 第62-63页 |
| ·海洋微生物的分离 | 第62页 |
| ·目的菌株的菌落PCR筛选 | 第62-63页 |
| ·菌种的基本特征 | 第63页 |
| ·16S rDNA基因的克隆 | 第63页 |
| ·系统发育树的构建 | 第63页 |
| ·褐藻胶生物合成操纵元基因全序列的克隆与分析 | 第63-66页 |
| ·褐藻胶生物合成操纵元基因的生物信息学分析 | 第64页 |
| ·Pseudomonas sp. QDA菌株高分子量基因组DNA的制备 | 第64-65页 |
| ·操纵元基因序列的简并PCR步移法克隆 | 第65页 |
| ·操纵元全基因序列的分析 | 第65-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-71页 |
| ·海洋微生物的筛选 | 第66页 |
| ·菌株的基本特征 | 第66页 |
| ·16S rDNA序列与系统发育树 | 第66-67页 |
| ·操纵元全基因序列的克隆 | 第67-68页 |
| ·全操纵元基因序列的分析 | 第68-69页 |
| ·操纵元5′-调控区DNA序列的分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| ·微生物的筛选策略 | 第71页 |
| ·菌种的16S rDNA鉴定 | 第71-72页 |
| ·操纵元序列特征的分析 | 第72页 |
| ·操纵元的转录机制分析 | 第72-74页 |
| 总结与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 文章发表情况 | 第83页 |
