| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 引言 | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述 哺乳动物FSH和LH研究进展 | 第18-37页 |
| ·促性腺激素(FSH/LH)的发现和来源 | 第18页 |
| ·FSH/LH的 | 第18-24页 |
| ·FSH/LH受体 | 第24-25页 |
| ·FSH/LH的生物学功能及其应用 | 第25-27页 |
| ·FSH/LH的表达和分泌调控 | 第27-31页 |
| ·重组促性腺激素的研究进展 | 第31-37页 |
| 第二章 大熊猫FSH和LH基因的克隆及其表达研究 | 第37-69页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 1 材料和方法 | 第38-54页 |
| ·材料与试剂 | 第38-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·大熊猫α，FSHβ和LHβ亚基编码区序列的克隆 | 第41-46页 |
| ·总RNA的提取 | 第41页 |
| ·PCR引物的设计 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR | 第42页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第42-45页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第46页 |
| ·计算机序列分析 | 第46页 |
| ·克隆序列的GenBank登录 | 第46页 |
| ·FSH和LH亚基基因在大肠杆菌中的表达 | 第46-49页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·大熊猫α、FSHβ和LHβ亚基基因在BL21中的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·表达蛋白的可溶性和纯化分析 | 第48-49页 |
| ·FSH和LH在COS7细胞中的表达分析 | 第49-54页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR检测COS7细胞中FSH和LH基因的转录 | 第51-52页 |
| ·重组FSH和LH的生物活性检测 | 第52-54页 |
| ·大鼠睾丸Sertoli细胞的的分离和培养 | 第52-53页 |
| ·重组FSH刺激Sertoli细胞分泌雌二醇的测定 | 第53页 |
| ·大鼠睾丸Leydig's细胞的分离和培养 | 第53-54页 |
| ·重组LH刺激Leydig's细胞分泌睾酮的测定 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-66页 |
| ·大熊猫α，FSHβ和LHβ编码区序列的克隆 | 第54-56页 |
| ·总RNA的分离 | 第54页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·双酶切鉴定 | 第56页 |
| ·测序分析 | 第56-58页 |
| ·同源性比较分析 | 第58-59页 |
| ·FSH和LH亚基在大肠杆菌中的表达 | 第59-62页 |
| ·FSH和LH在哺乳动物细胞中的表达分析 | 第62-66页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·脂质体转染和RT-PCR检测基因转录 | 第64-65页 |
| ·重组FSH和LH的体外活性检测 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-69页 |
| 第三章 小熊猫促黄体素(LH)基因的克隆和序列分析 | 第69-79页 |
| 前言 | 第69-70页 |
| 1 材料和方法 | 第70-72页 |
| ·材料与试剂 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-77页 |
| ·小熊猫垂体总RNA的分离 | 第72页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第72页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第73页 |
| ·小熊猫α和LHβ亚基编码区序列cDNA的测序 | 第73-74页 |
| ·序列分析 | 第74页 |
| ·同源分析 | 第74-76页 |
| ·进化树分析 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 东北虎FSH和LH基因的克隆及其序列比较分析 | 第79-87页 |
| 前言 | 第79页 |
| 1 材料和方法 | 第79-80页 |
| ·材料与试剂 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-86页 |
| ·总RNA分离 | 第80-81页 |
| ·RT-PCR扩增和PCR产物克隆 | 第81页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第81-82页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第82-83页 |
| ·测序和同源性分析 | 第83-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 第五章 大熊猫GH/GHR基因的克隆和GH在大肠杆菌中的表达研究 | 第87-101页 |
| 前言 | 第87-88页 |
| 1 材料和方法 | 第88-91页 |
| ·材料与试剂 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-91页 |
| ·总RNA的提取 | 第89页 |
| ·GH基因的克隆 | 第89页 |
| ·GHR基因的克隆 | 第89-90页 |
| ·GH在大肠杆菌中的表达 | 第90-91页 |
| ·大熊猫GH原核重组表达载体的构建 | 第90页 |
| ·GH基因在大肠杆菌中的表达 | 第90-91页 |
| ·溶解和纯化融合蛋白 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-98页 |
| ·总RNA的分离 | 第91页 |
| ·大熊猫GH克隆和序列分析 | 第91-93页 |
| ·大熊猫GHR的克隆和序列分析 | 第93-97页 |
| ·大熊猫GH在大肠杆菌中的表达研究 | 第97-98页 |
| ·GH重组表达质粒的构建和鉴定 | 第97-98页 |
| ·大熊猫GH在BL21中的融合表达和纯化分析 | 第98页 |
| 3 讨论 | 第98-101页 |
| 参考文献 | 第101-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第119页 |
