中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
本文缩写词 | 第9-10页 |
前言 | 第10-12页 |
Ⅰ 文献综述 | 第12-25页 |
1.1 水稻遗传转化技术的发展 | 第12-13页 |
1.2 蛋白酶抑制剂基因 | 第13-15页 |
1.3 标记基因 | 第15-16页 |
1.4 去除选择标记基因的必要性 | 第16-17页 |
1.5 去除选择标记基因的策略 | 第17-24页 |
1.5.1 位点特异性重组系统 | 第17-20页 |
1.5.2 利用共转化系统删除选择标记基因 | 第20-21页 |
1.5.3 利用转座子成分删除选择标记基因 | 第21-22页 |
1.5.4 同源序列重组删除选择标记基因 | 第22-23页 |
1.5.5 多次自动转化(MAT)载体系统 | 第23-24页 |
1.6 本文的立题思想 | 第24-25页 |
Ⅱ 材料与方法 | 第25-32页 |
2.1 实验材料 | 第25-26页 |
2.1.1 供试水稻品种 | 第25页 |
2.1.2 菌株及质粒 | 第25-26页 |
2.1.3 主要试剂和仪器 | 第26页 |
2.2 实验方法 | 第26-32页 |
2.2.1 水稻胚性愈伤组织的诱导及继代 | 第26-27页 |
2.2.2 农杆菌介导的水稻愈伤转化方法 | 第27-28页 |
2.2.3 抗性愈伤的继代与再生成完整植株 | 第28页 |
2.2.4 水稻叶片DNA提取 | 第28-29页 |
2.2.5 PCR检测转基因植株 | 第29-30页 |
2.2.6 双探针PCR-Southern blot检测 | 第30页 |
2.2.7 转基因植株后代的田间抗虫性调查 | 第30-31页 |
2.2.8 转基因水稻抗虫性的离体检测方法 | 第31页 |
2.2.9 转基因植株潮霉素抗性测定 | 第31-32页 |
Ⅲ 结果和分析 | 第32-43页 |
3.1 双T-DNA载体转化明恢86获得再生植株 | 第32-34页 |
3.2 转基因T0代植株目的基因与选择标记基因共转化频率检测 | 第34-36页 |
3.3 共转化植株后代目的基因与选择标记基因的分离检测 | 第36-40页 |
3.4 T_2代植株检测获得纯合无选择标记的转sck基因株系 | 第40页 |
3.5 T_3代植株检测获得纯合无选择标记的转sck基因植株 | 第40-41页 |
3.6 转sck基因水稻的抗虫性分析 | 第41-43页 |
Ⅳ 讨论 | 第43-47页 |
4.1 双T-DNA共转化获得无选择标记的抗虫转基因籼稻是十分可行的 | 第43页 |
4.2 无选择标记的转基因植株在杂交育种中的应用 | 第43-44页 |
4.3 目的基因与选择标记基因的共转化频率及其在后代植株中的分离 | 第44-45页 |
4.4 共转化系统去除选择标记基因缺憾与改进策略 | 第45-46页 |
4.5 双T-DNA系统与去除标记基因的其他方法的比较 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
附件 | 第52-57页 |
致谢 | 第57页 |