| 第—部分 VEGF受体KDR、FLT-1结合小肽对血管形成和肿瘤生长的抑制 | 第1-92页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 肿瘤新生血管形成 | 第12-16页 |
| ·肿瘤细胞中VEGF的产生 | 第12-13页 |
| ·VEGF与其受体KDR、FLT-1的相互作用 | 第13-14页 |
| ·Angiopoietin-1／2、VEGF与Tie-2的相互作用 | 第14-16页 |
| 2 小肽与抗肿瘤血管形成 | 第16-20页 |
| ·合成来源于基质蛋白TSP-1结构域的肽具有抗血管生成活性 | 第17页 |
| ·合成来源于纤连蛋白的短肽抑制鼠黑色素瘤细胞的转移 | 第17页 |
| ·具RGD(Arg-Gly-Asp)的小肽与αV整合素具高亲和力 | 第17-18页 |
| ·结合VEGF中受体结合结构域的短肽 | 第18-19页 |
| ·封闭VEGF受体KDR的7肽 | 第19-20页 |
| 3 参考文献 | 第20-24页 |
| 前言 | 第24-26页 |
| 一 材料和方法 | 第26-56页 |
| ·实验材料及溶液配制 | 第26-33页 |
| ·可溶性VEGF受体FLT-1的制备 | 第33-38页 |
| ·GST-VEGF与GST-KDR的表达及纯化 | 第38页 |
| ·ELISA检测phage-F56／F90／K237的结合活性 | 第38-39页 |
| ·高滴度阳性噬菌体的制备 | 第39-40页 |
| ·小肽融合蛋白的表达及纯化 | 第40-43页 |
| ·竞争性实验检测小肽融合蛋白的结合活性 | 第43-44页 |
| ·抗DHFR单克隆抗体的制备 | 第44-51页 |
| ·Western blot检测小肽融合蛋白 | 第51页 |
| ·人脐静脉内皮细胞的原代培养 | 第51页 |
| ·ELISA检测小肽融合蛋白与可溶性受体的结合 | 第51-52页 |
| ·免疫细胞化学方法检测小肽融合蛋白与人脐静脉内皮细胞的结合 | 第52-53页 |
| ·~3HTdR掺入实验 | 第53页 |
| ·鸡胚尿囊膜血管形成抑制实验 | 第53-54页 |
| ·动物实验 | 第54-56页 |
| 二 结果和分析 | 第56-78页 |
| ·FLT-1胞外Ⅰ-Ⅳ区的克隆及原核表达 | 第56-58页 |
| ·阳性噬菌体克隆能特异结合相应靶分子 | 第58页 |
| ·小肽融合蛋白表达载体pQE42-F56／F90／K237的构建 | 第58-59页 |
| ·DHFR-F56／F90／K237的表达、纯化 | 第59-61页 |
| ·制备抗DHFR单克隆抗体 | 第61-65页 |
| ·Western blot检测小肽融合表达蛋白 | 第65-66页 |
| ·DHFR-F56／F90能结合FLT-1及DHFR-K237能结合KDR | 第66-67页 |
| ·DHFR-K237抑制血管内皮细胞的增殖 | 第67-69页 |
| ·DHFR-F56／K237抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的增生 | 第69页 |
| ·DHFR-F56／K237抑制荷人胃癌移植裸鼠瘤的生长 | 第69-73页 |
| ·合成小肽F56及K237竞争抑制VEGF结合其受体 | 第73-74页 |
| ·合成小肽K237抑制人脐静脉内皮细胞的增殖 | 第74页 |
| ·合成小肽F56及K237抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管形成 | 第74-75页 |
| ·小肽F56及K237抑制荷人乳腺癌移植SCID小鼠肿瘤的生长和转移 | 第75-78页 |
| 三 讨论 | 第78-86页 |
| ·小肽融合蛋白的制备 | 第79-81页 |
| ·抗DHFR单克隆抗体的制备 | 第81-82页 |
| ·小肽融合蛋白及合成小肽的体外活性鉴定 | 第82-83页 |
| ·合成小肽及小肽融合蛋白的体内活性检测 | 第83-86页 |
| 四 小结 | 第86-87页 |
| 五 参考文献 | 第87-92页 |
| 第二部分 栝楼冠瘿组织、毛状根的培养及天花粉蛋白的产生 | 第92-145页 |
| 中文摘要 | 第92-93页 |
| 英文摘要 | 第93-95页 |
| 文献综述 | 第95-102页 |
| 1 天花粉蛋白的研究历史 | 第95页 |
| 2 天花粉蛋白的物理和化学性质 | 第95-96页 |
| 3 天花粉蛋白的结构 | 第96-97页 |
| 4 天花粉蛋白与核酸分子的相互作用——天花粉蛋白的酶活性 | 第97页 |
| 5 天花粉蛋白抗胃癌、结直肠癌的活性 | 第97-102页 |
| 前言 | 第102-103页 |
| 一 根癌农杆菌对栝楼的遗传转化 | 第103-113页 |
| 1 材料和方法 | 第103-106页 |
| ·实验材料 | 第103页 |
| ·培养基 | 第103-104页 |
| ·冠瘿碱检测溶液的配制 | 第104页 |
| ·栝楼无菌苗的获得 | 第104页 |
| ·根癌农杆菌C58的保存与活化 | 第104页 |
| ·栝楼冠瘿组织的诱导和除菌 | 第104页 |
| ·栝楼冠瘿组织中冠瘿碱的测定 | 第104-105页 |
| ·基本培养基的筛选 | 第105页 |
| ·栝楼冠瘿组织培养条件的优化 | 第105页 |
| ·栝楼冠瘿组织在液体培养时生长与生产动态的研究 | 第105-106页 |
| ·栝楼冠瘿组织中总蛋白的测定 | 第106页 |
| 2 结果和分析 | 第106-111页 |
| ·栝楼冠瘿瘤的诱导和除菌 | 第106页 |
| ·栝楼冠瘿组织基本培养基的筛选 | 第106-107页 |
| ·栝楼冠瘿组织培养条件的优化 | 第107-110页 |
| ·栝楼冠瘿组织细胞生长曲线及总蛋白含量的变化 | 第110-111页 |
| ·栝楼冠瘿组织中冠瘿碱的检测 | 第111页 |
| 3 讨论 | 第111-113页 |
| 二 Ti和Ri质粒对栝楼双转化的研究 | 第113-120页 |
| 1 材料和方法 | 第113-114页 |
| ·发根农杆菌菌株的活化 | 第113页 |
| ·栝楼冠瘿组织诱导再生植株 | 第113页 |
| ·栝楼两种栝楼毛状根的获得及除菌 | 第113页 |
| ·冠瘿碱(nopaline)的检测 | 第113页 |
| ·甘露碱(mannopine)的检测 | 第113-114页 |
| ·栝楼毛状根的培养 | 第114页 |
| ·栝楼毛状根中总蛋白的测定 | 第114页 |
| 2 结果和分析 | 第114-118页 |
| ·栝楼冠瘿组织再生植株 | 第114页 |
| ·栝楼双转化毛状根与普通毛状根的诱导及培养 | 第114-115页 |
| ·Ti和Ri质粒转化的初步证实 | 第115-116页 |
| ·栝楼两种毛状根的液体培养 | 第116-118页 |
| 3 讨论 | 第118-120页 |
| 三 栝楼冠瘿组织培养及其天花粉蛋白的产生 | 第120-141页 |
| 1 材料和方法 | 第120-128页 |
| ·添加有机物对栝楼冠瘿组织培养的影响 | 第120页 |
| ·生物反应器技术在栝楼冠瘿组织培养时的应用 | 第120-121页 |
| ·Southern blot检测 | 第121-126页 |
| ·从栝楼块根和冠瘿组织中纯化天花粉蛋白 | 第126页 |
| ·抗天花粉蛋白多抗的制备 | 第126-127页 |
| ·Westernblot分析 | 第127-128页 |
| ·MTT比色法检测天花粉蛋白对肿瘤细胞生长的作用 | 第128页 |
| 2 结果和分析 | 第128-139页 |
| ·添加有机物对冠瘿组织培养的影响 | 第128-129页 |
| ·搅拌式生物反应器能培养栝楼冠瘿组织 | 第129-130页 |
| ·Southern blot检测 | 第130-135页 |
| ·Western blot分析 | 第135-137页 |
| ·天花粉蛋白抑制人胃癌细胞生长 | 第137-139页 |
| 3 讨论 | 第139-141页 |
| 四 小结 | 第141-142页 |
| 五 参考文献 | 第142-145页 |
| 主要缩略词 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 个人主要经历 | 第148页 |
| 攻读博士学位期间发表及待发表的文章 | 第148-149页 |
| 附：已发表论文复印件 | 第149-166页 |
