| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·冷冻对精子遗传物质的影响 | 第11-13页 |
| ·冷冻对精子染色体的影响 | 第11-12页 |
| ·冷冻保存对精子染色质的影响 | 第12页 |
| ·冷冻对精子转录本的影响 | 第12-13页 |
| ·精子中mRNA研究方法的进展 | 第13-21页 |
| ·差别筛选(Differential Screening) | 第13-14页 |
| ·消减杂交(Subtractive Hybridization) | 第14页 |
| ·mRNA差异显示技术(Differential Display RT-PCR,DD RT-PCR) | 第14-15页 |
| ·RNA任意引物PCR(RNA arbitrarily primed PCR,RAP PCR) | 第15-16页 |
| ·代表性差示分析(Representational Differential Analysis,RDA) | 第16-17页 |
| ·DNA微阵列技术(DNA microarray) | 第17-18页 |
| ·基因表达系列分析技术(SAGE) | 第18页 |
| ·抑制消减杂交技术(SSH) | 第18-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-36页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·主要酶类及试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·牛精液样品及组织样品来源 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-36页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·试剂的配制 | 第22页 |
| ·传统TRIzol法提取牛组织RNA | 第22-23页 |
| ·精液样本计数、体细胞的去除及洗涤 | 第23页 |
| ·传统TRIzol法和热TRIzol法对精子细胞裂解效果比较 | 第23页 |
| ·热Trizol法提取牛精子RNA | 第23-24页 |
| ·总RNA中基因组DNA污染的去除 | 第24页 |
| ·精子总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测分析 | 第24页 |
| ·精子总RNA定量分析 | 第24页 |
| ·精子总RNA完整性、基因组DNA污染和体细胞污染的检测 | 第24-25页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第25页 |
| ·色谱柱纯化 | 第25-26页 |
| ·LD PCR扩增cDNA | 第26页 |
| ·Super Smart扩增产物的酚仿抽提 | 第26-27页 |
| ·RsaI酶切 | 第27-28页 |
| ·接头的连接 | 第28-29页 |
| ·第一轮杂交 | 第29-30页 |
| ·第二轮杂交 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·消减cDNA文库的构建 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的挑选与PCR扩增验证 | 第33-34页 |
| ·cDNA文库的测序、序列分析 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-43页 |
| ·精子洗涤结果 | 第36页 |
| ·传统TRIzol法和热TRIzol法对精子细胞裂解的结果 | 第36页 |
| ·热Trizol法提取精子RNA结果 | 第36-37页 |
| ·精子总RNA的定量结果 | 第37页 |
| ·精子总RNA完整性、体细胞污染和DNA污染检测结果 | 第37-38页 |
| ·LD PCR优化图谱结果 | 第38-39页 |
| ·RsaI酶切结果 | 第39页 |
| ·经过两轮杂交后二次PCR效果检测 | 第39-41页 |
| ·消减cDNA文库构建及菌体PCR检测结果 | 第41页 |
| ·消减文库的测序及分析结果 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第43-46页 |
| ·精子总RNA提取相关讨论分析 | 第43-44页 |
| ·super smart技术对精子RNA扩增的分析 | 第44-45页 |
| ·测序结果的分析 | 第45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 附录1:Super SMART~(TM)技术扩增总RNA原理图 | 第52-53页 |
| 附录2:Super SMART~(TM)技术优化PCR体系原理图: | 第53-54页 |
| 附录3:抑制消减杂交技术原理图: | 第54-55页 |
| 附录4 载体 | 第55-56页 |
| 附录5 分析软件及网站 | 第56-57页 |
| 附录6 文库序列BLAST分析结果 | 第57-59页 |
