| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 1. 课题研究的背景及意义 | 第10-11页 |
| 2. 课题拟解决的问题及研究目的 | 第11页 |
| 3. 本论文主要研究内容 | 第11页 |
| 4. 本论文的主要创新点 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·纤维素酶 | 第12-15页 |
| ·微生物纤维素酶的来源 | 第12-13页 |
| ·真菌 | 第12页 |
| ·细菌 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的作用类型 | 第13页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶催化域(CD) | 第14页 |
| ·连接肽(linker) | 第14-15页 |
| ·纤维素酶结合域(CBD) | 第15-20页 |
| ·CBD 的分类 | 第15-16页 |
| ·真菌 CBD 与细菌 CBD 的区别 | 第16-17页 |
| ·CBD 在纤维降解中的作用 | 第17-18页 |
| ·CBD 的应用研究 | 第18-20页 |
| ·CBD 在生物工艺学上的应用 | 第18页 |
| ·CBD 在纤维修饰及造纸工业的应用 | 第18-20页 |
| ·基因片段的合成 | 第20-21页 |
| ·外源基因表达系统 | 第21-25页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第22-24页 |
| ·大肠杆菌表达载体的类型 | 第22-23页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第23页 |
| ·包涵体蛋白复性机制研究 | 第23-24页 |
| ·真核表达系统 | 第24-25页 |
| 第二章 包含双纤维素结合域（CBD）基因的人工构建 | 第25-41页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·工具酶 | 第25-26页 |
| ·仪器 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·LB (Luria-Bertani) 液体培养基 | 第26页 |
| ·LB+Amp 固体培养基 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·来源于EGI 的双CBD 基因片段dEG1CBD 的构建 | 第27-29页 |
| ·引物的设计 | 第27页 |
| ·PCR 核心模板法合成dEG1CBD | 第27-29页 |
| ·来源于celc12 的双CBD 基因片段dcelc12CBD 的构建 | 第29-30页 |
| ·引物的设计 | 第29页 |
| ·dcelc12CBD 的合成 | 第29-30页 |
| ·来源于cbd3-101 的双CBD 基因片段dcbd3-101CBD 的构建 | 第30页 |
| ·引物的设计 | 第30页 |
| ·dcbd3-101CBD 的合成 | 第30页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第30-31页 |
| ·合成的基因片段与质粒载体pGEM-T 的连接 | 第31页 |
| ·重组质粒d CBD-pGEM-T 到大肠杆菌中的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒d CBD-pGEM-T 阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·质粒的少量提取 | 第32页 |
| ·dCBD 重组表达质粒的构建及筛选 | 第32-33页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第33页 |
| ·结果讨论 | 第33-40页 |
| ·来源于EGI 的双CBD 基因片段dEG1CBD 的构建 | 第33-34页 |
| ·来源于celc12 的双CBD 基因dcelc12CBD 片段的构建 | 第34-35页 |
| ·来源于cbd3-101 的双CBD 基因dcbd3-101CBD 片段的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒dCBD-pGEM-T 阳性克隆的筛选 | 第36-38页 |
| ·重组质粒dEG1CBD-pGEM-T 阳性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| ·重组质粒dcelc12CBD-pGEM-T 阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| ·重组质粒dcbd3-101CBD -pGEM-T 阳性克隆的筛选 | 第37-38页 |
| ·dEG1CBD 表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·dEG1CBD-pet-32b 表达质粒的构建 | 第38页 |
| ·dEG1CBD 其它表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·dcelc12CBD- pet-32a 表达质粒的构建 | 第39页 |
| ·dcbd3-101CBD- pet-32a 表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 三种DCBD 重组蛋白的表达研究 | 第41-57页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌种 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·缓冲液 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·d CBD 重组表达菌株的构建 | 第42-43页 |
| ·d CBD 重组表达蛋白的表达 | 第43页 |
| ·重组蛋白的可溶性鉴定 | 第43页 |
| ·表达结果的SDS-PAGE 分析 | 第43-45页 |
| ·溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·分离胶的配制 | 第44页 |
| ·浓缩胶的配制 | 第44页 |
| ·样品的准备 | 第44页 |
| ·加样 | 第44-45页 |
| ·电泳 | 第45页 |
| ·染色与脱色 | 第45页 |
| ·不同IPTG 诱导浓度及诱导温度对表达的影响 | 第45页 |
| ·重组蛋白的亲和层析纯化验证 | 第45-46页 |
| ·Native 条件下的亲和纯化 | 第45-46页 |
| ·Denature 条件下的纯化 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·d CBD 重组表达蛋白的诱导表达 | 第46-48页 |
| ·dEG1CBD- pet-32b 的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·dcelc12CBD- pet-32a 的诱导表达 | 第47页 |
| ·dcbd3-101CBD- pet-32a 的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的可溶性鉴定 | 第48-49页 |
| ·不同IPTG 诱导浓度及诱导温度对表达的影响 | 第49-52页 |
| ·30℃不同IPTG 诱导浓度对dEG1CBD 蛋白的诱导表达的影响 | 第49-50页 |
| ·25℃不同IPTG 诱导浓度对dEG1CBD 蛋白诱导表达的影响 | 第50页 |
| ·30℃不同IPTG 诱导浓度对dcelc12cbd 蛋白诱导表达的影响 | 第50-51页 |
| ·25℃不同IPTG 诱导浓度对dcelc12cbd 蛋白诱导表达的影响 | 第51-52页 |
| ·30℃不同IPTG 诱导浓度条件下dcbd3-101CBD 蛋白的可溶性分析 | 第52页 |
| ·重组蛋白的纯化验证 | 第52-54页 |
| ·dEG1CBD 蛋白的纯化验证 | 第52-53页 |
| ·dcelc12cbd 蛋白的纯化验证 | 第53-54页 |
| ·dcbd3-101CBD 蛋白的纯化验证 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 DCBD 重组蛋白的复性及吸附性能研究 | 第57-66页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·缓冲液 | 第57-58页 |
| ·仪器及设备 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·蛋白测定方法 | 第58页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白对微晶纤维素（Avicel）的吸附 | 第59页 |
| ·重组蛋白对滤纸机械性能的影响 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第60页 |
| ·目的蛋白的复性 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白对Avicel 的吸附 | 第61-64页 |
| ·dEG1CBD 蛋白对Avicel 的吸附 | 第61-62页 |
| ·dcelc12cbd 蛋白对Avicel 的吸附 | 第62-63页 |
| ·dcbd3-101cbd 蛋白对 Avicel 的吸附 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白对滤纸机械性能的影响 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 详细摘要 | 第72-75页 |
