| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| ·硒 | 第11-12页 |
| ·茶叶中的硒 | 第12-13页 |
| ·硒对茶树的作用 | 第13页 |
| ·植物的硒代谢途径 | 第13-15页 |
| ·硒代半胱氨酸甲基转移酶（SMT） | 第15页 |
| ·关于富硒食品的研究 | 第15-16页 |
| ·植物对硒污染土壤的修复作用 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-19页 |
| ·研究意义及目的 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究 | 第17-18页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究 | 第18页 |
| ·技术路线 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-37页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·仪器与试剂 | 第19-24页 |
| ·主要实验仪器 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·实验中常用试剂配方 | 第20-24页 |
| ·实验方法 | 第24-37页 |
| ·总RNA 的提取和检测 | 第24-25页 |
| ·α-tubulin 原核表达载体的构建 | 第25-30页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第25页 |
| ·α-tubulin 全长cDNA 的扩增 | 第25页 |
| ·凝胶电泳回收PCR 产物 | 第25-26页 |
| ·E. coli DH5α感受态的制备 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物与载体的连接 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·重组子的鉴定 | 第27-28页 |
| ·α-tubulin 原核表达载体的构建 | 第28页 |
| ·α-tubulin 的原核表达 | 第28-30页 |
| ·α-tubulin 原核表达条件优化 | 第30页 |
| ·α-tubulin 的纯化 | 第30-31页 |
| ·His 标签融合蛋白的纯化(按照Novagen 公司使用说明进行) | 第30-31页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·α-tubulin 兔多克隆抗体的制备 | 第31-33页 |
| ·抗原的制备 | 第31-32页 |
| ·α-tubulin 兔抗血清的制备 | 第32页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第32-33页 |
| ·茶树叶片总蛋白粗提液的制备 | 第33页 |
| ·Western blot 检测抗体特异性 | 第33-34页 |
| ·SMT 兔多克隆抗体的制备及检测 | 第34页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究 | 第34-35页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究 | 第35-37页 |
| ·富硒茶与非富硒茶叶片总RNA 的提取与定量 | 第35页 |
| ·cDNA 一链的合成及定量 | 第35页 |
| ·半定量PCR 引物设计 | 第35页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第35-36页 |
| ·退火温度的优化 | 第35页 |
| ·模板量的优化 | 第35-36页 |
| ·循环数的优化 | 第36页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-48页 |
| ·RNA 的提取与质量检测 | 第37-38页 |
| ·RNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·紫外分光光度法检测RNA 纯度 | 第37-38页 |
| ·cDNA 第一链的电泳检测及浓度测定 | 第38页 |
| ·α-tubulin 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·α-tubulin 全长基因克隆 | 第38-39页 |
| ·菌落PCR | 第39页 |
| ·双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·α-tubulin 的原核表达 | 第39-40页 |
| ·α-tubulin 原核表达的优化 | 第40-42页 |
| ·最佳诱导温度 | 第40-41页 |
| ·最佳诱导IPTG 浓度 | 第41页 |
| ·最佳诱导菌液浓度 | 第41-42页 |
| ·最佳诱导时间 | 第42页 |
| ·α-tubulin 的纯化 | 第42-43页 |
| ·茶树叶片总蛋白粗提液的制备 | 第43页 |
| ·α-tubulin 和 SMT 兔多克隆抗体特异性鉴定 | 第43-44页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究 | 第44-45页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究 | 第45-48页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第45-47页 |
| ·退火温度的优化 | 第45页 |
| ·模板量的优化 | 第45-46页 |
| ·循环数的优化 | 第46-47页 |
| ·SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-51页 |
| ·CTAB-LiCl 法提取总 RNA | 第48页 |
| ·半定量PCR | 第48页 |
| ·His-Tua 的纯化方式 | 第48-49页 |
| ·多克隆抗体的制备方法 | 第49页 |
| ·SMT 转录与表达水平差异形成的可能原因 | 第49页 |
| ·由SMT 转录与表达水平所得的一些关于生产富硒茶的建议 | 第49-51页 |
| 6 结论 | 第51-52页 |
| ·α-tubulin 的原核表达 | 第51页 |
| ·α-tubulin 和 SMT 多克隆抗体的制备 | 第51页 |
| ·富硒茶与非富硒茶叶片中SMT 表达水平研究 | 第51页 |
| ·富硒茶与非富硒茶叶片中SMT 转录水平研究 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录A 中英文缩写与注释 | 第56-58页 |
| 附录B α-tubulin 测序及比对结果 | 第58-63页 |
| 附录C 蛋白序列比对结果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
| 成果清单 | 第65页 |
