| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·苏云金芽孢杆菌基因 | 第11-12页 |
| ·Bt 毒蛋白杀虫机理 | 第11页 |
| ·Bt 毒蛋白的分类 | 第11-12页 |
| ·转Bt 基因植物研究 | 第12-13页 |
| ·影响Bt 基因在转基因植物中表达的因素 | 第13-15页 |
| ·表达单元及辅助因子 | 第13-14页 |
| ·植物发育 | 第14页 |
| ·外部环境条件 | 第14页 |
| ·受体植物的遗传背景 | 第14-15页 |
| ·Bt 基因在受体细胞染色体上的插入位点 | 第15页 |
| ·转基因植物中Bt 基因的沉默 | 第15页 |
| ·解决害虫对转Bt 基因作物产生抗性的策略 | 第15-17页 |
| ·选择启动子 | 第16页 |
| ·同时使用两种以上的Bt 基因转化 | 第16页 |
| ·联合使用Bt 基因和其它类型的抗虫基因 | 第16-17页 |
| ·获得多价转基因植物策略 | 第17页 |
| ·杨树Bt 抗虫基因工程的研究 | 第17-19页 |
| ·国外杨树Bt 抗虫基因工程研究进展 | 第17-18页 |
| ·国内杨树Bt 抗虫基因工程研究进展 | 第18-19页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 植物表达载体构建 | 第20-37页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·常用培养基和试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·试验方法 | 第21-33页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt1 表达载体的构建 | 第21-27页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt3 表达载体的构建 | 第27-30页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt1-Bt3 表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·质粒pCAMBIA1305-Bt1 的PCR 检测结果 | 第33页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt1 阳性克隆的酶切及PCR 鉴定 | 第33-34页 |
| ·质粒pCAMBIA1305-Bt3 的PCR 检测结果 | 第34页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt3 阳性克隆的酶切及PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·质粒 pCAMBIA1305-Bt1-Bt3 的酶切及 PCR 检测 | 第35页 |
| ·pCAMBIA3301-Bt1-Bt3 阳性克隆鉴定 | 第35-37页 |
| 3 烟草遗传转化及转化植株的检测 | 第37-51页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·抗生素 | 第37页 |
| ·重要试剂、酶和试剂盒 | 第37-38页 |
| ·重要仪器设备 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-43页 |
| ·选择压浓度的确定 | 第38页 |
| ·抑菌抗生素浓度的确定 | 第38页 |
| ·菌株培养及菌液制备 | 第38-39页 |
| ·农杆菌介导的基因转化 | 第39页 |
| ·转基因烟草的抗性鉴定 | 第39页 |
| ·转基因烟草的DNA 水平检测 | 第39-40页 |
| ·转基因烟草的蛋白质水平检测 | 第40-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·潮酶素(Hyg)对烟草叶片分化的影响 | 第43页 |
| ·潮酶素(Hyg)对嫩茎生根的影响 | 第43-44页 |
| ·头孢噻肟钠(CTX)对叶片分化的影响 | 第44页 |
| ·头孢噻肟钠(CTX)对农杆菌的抑制能力 | 第44-45页 |
| ·遗传转化单、双价Bt 基因转基因烟草的获得 | 第45-46页 |
| ·转化植株抗性鉴定 | 第46-47页 |
| ·转基因烟草植株的PCR 鉴定 | 第47-49页 |
| ·转基因烟草Bt 毒蛋白的ELISA 检测 | 第49-51页 |
| 4 741 杨遗传转化及转化植株的检测 | 第51-64页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌种和质粒 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-55页 |
| ·叶片再生体系的确立 | 第52页 |
| ·选择压浓度的确定 | 第52-53页 |
| ·抑菌抗生素浓度的确定 | 第53页 |
| ·农杆菌介导的741 杨遗传转化体系的优化 | 第53页 |
| ·农杆菌介导法转化741 杨 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的抗性鉴定 | 第54页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第54页 |
| ·转基因植株Bt 毒蛋白的ELISA 检测 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-64页 |
| ·741 杨叶片再生体系的确立 | 第55页 |
| ·潮霉素(Hyg)对叶片分化的影响 | 第55-56页 |
| ·潮霉素(Hyg)对嫩茎生根的影响 | 第56页 |
| ·头孢噻肟钠(CTX)对叶片分化的影响 | 第56页 |
| ·头孢噻肟钠(CTX)抑菌浓度的确定 | 第56-57页 |
| ·影响农杆菌转化效率因素的优化 | 第57-59页 |
| ·转双 Bt 基因741 杨的筛选及获得 | 第59-60页 |
| ·转基因植株的抗性鉴定 | 第60-61页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·转基因植株Bt 毒蛋白的ELISA 检测 | 第62-64页 |
| 5 讨论 | 第64-69页 |
| ·植物表达载体构建 | 第64-65页 |
| ·标记基因的选择 | 第65页 |
| ·Bt 毒蛋白表达的分析 | 第65-66页 |
| ·转双Bt 基因741 杨的获得 | 第66-68页 |
| ·转Bt 抗虫基因植物潜在的生态风险性 | 第68-69页 |
| 6 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
