中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-12页 |
前言 | 第12-15页 |
技术路线 | 第15-16页 |
材料与方法 | 第16-32页 |
1. 材料 | 第16-17页 |
·质粒 | 第16页 |
·实验动物及标本 | 第16页 |
·主要试剂 | 第16-17页 |
·主要仪器 | 第17页 |
·其它材料 | 第17页 |
·主要溶液及培养基(配制见附录) | 第17页 |
2. 方法 | 第17-26页 |
·表达载体构建 | 第17-22页 |
·目的 cDNA 的表达 | 第22-23页 |
·样本收集和实验动物处理 | 第23-24页 |
·精子样本基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
·精子细胞间期核制片 | 第25页 |
·人精子染色体制片 | 第25-26页 |
·荧光原位杂交探针的制备 | 第26页 |
3. 实验程序 | 第26-32页 |
·PCR检测 | 第26-27页 |
·RT-PCR检测 | 第27-29页 |
·FISH检测 | 第29-30页 |
·免疫荧光检测 | 第30-32页 |
结果 | 第32-42页 |
1. 重组质粒构建与鉴定 | 第32-35页 |
·重组质粒 pIRES2-EGFP-gag | 第32-33页 |
·质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
·质粒的PCR鉴定 | 第33-34页 |
·重组质粒目的基因的表达检测 | 第34-35页 |
2. 精子基因组中gag基因的整合与转录 | 第35-37页 |
·精子基因组DNA的PCR结果 | 第35页 |
·人精子细胞核中gag基因的整合 | 第35-36页 |
·人精子染色体上gag基因的整合 | 第36-37页 |
·精子细胞中gag基因的转录 | 第37页 |
3. 胚胎细胞中gag基因的整合 | 第37-39页 |
·受精卵FISH结果 | 第37-38页 |
·2 -细胞胚FISH结果 | 第38-39页 |
4. 胚胎细胞中gag基因的转录 | 第39页 |
5. 精子和胚胎细胞中 gag p24 蛋白的表达 | 第39-42页 |
·人精子细胞免疫荧光检测结果 | 第39-40页 |
·2-细胞胚免疫荧光检测结果 | 第40-42页 |
讨论 | 第42-46页 |
全文小结 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-51页 |
附录1:主要混合液及培养基 | 第51-55页 |
附录2:测序结果 | 第55-57页 |
致谢 | 第57-58页 |
综述 | 第58-65页 |
参考文献 | 第63-65页 |
个人简历 | 第65-66页 |